Hoechst33258染色液

Hoechst33258 Stain Solution

【保存条件】 

-20℃避光保存，有效期 6 个月。 

【概述】

 Hoechst 33258，也称 bisBenzimide H 33258 或 HOE 33258。分子式为 C25H24N6O·3HCl， 分子量为 533.88，CASNumber 23491-45-4。 Hoechst 33258 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33 258 染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258 也常用于普通的细胞核染色，或常规的 DNA 染色。 Hoechst 33258 的最大激发波长为 346nm，最大发射波长为 460nm；Hoechst 33258 和双 链 DNA 结合后，最大激发波长为 352nm，最大发射波长为 461nm。 本 Hoechst 33258 染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细 胞或组织的细胞核染色。 

【使用方法】 

该产品使用时应室温解冻并充分摇匀。 

1. 对于固定的细胞或组织： 

a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色， 则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33258 染色。如果不需 要进行其它染色，则直接进行后续的 Hoechst 33258 染色。 

b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33258 染色液，覆盖住样品即可。对于悬 浮细胞，至少加入待染色样品体积 3 倍的染色液，混匀。室温放置 3-5 分钟。 

c. 吸除 Hoechst 33258 染色液，用 TBST、PBS 或生理盐水洗涤 2-3 次，每次 3-5 分钟。 

d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细 胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。 

2. 对于活细胞或培养的组织：

a. 加入适当量 Hoechst 33258 染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一 个孔需加入 1ml 染色液，对于 96 孔板一个孔需加入 100 微升染色液。 

b. 在适宜于细胞培养的温度培养 20-30 分钟。弃染色液，用 PBS 或培养液洗涤 2-3 次即可 进行荧光检测。细胞发生凋亡时，在荧光显微镜下观察会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。 

【效果图】 

本产品用于活细胞染色效果参考图：

图 A 为正常细胞 Hoehst 33258 的染色效果图。图 B 中除了正常细胞外，还清晰可见呈现致密浓染的凋亡细胞。

【注意事项】 

1. Hoechst 33258 对人体有害，请注意适当防护。 

2. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。 

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

4. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。