TUNEL In Situ Apoptosis Kit (HRP-DAB Method) TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒(HRP-DAB显色法)产品货号:E-CK-A331 产品规格:20 Assays/50 Assays/100 Assays 产品简介 Elabscience®TUNEL In Situ Apoptosis Kit (HRP-DAB Method),灵敏度高、操作简便。本试剂盒适用于组织样本(石蜡切片、冰冻切片)和细胞样本(细胞涂片、爬片)的原位凋亡检测,检测结果可通过普通光学显微镜观察。检测原理 细胞在发生凋亡时,会激活一些特异性的 DNA 内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组 DNA,暴露的 3’-OH 可在末端脱氧核酸转移酶(TdT)的催化下与生物素标记的 dUTP 连接,辣根过氧化物酶(HRP)标记的 Streptavidin (Streptavidin-HRP)可与生物素结合,在 HRP 的催化下通过 DAB 显色来观测凋亡细胞,结果可通过普通光学显微镜进行观察。 检测样本类型 - 细胞样本 - 石蜡切片 - 冰冻切片 保存条件 Streptavidin-HRP 保存于 2~8°C,其余试剂 -20 °C 保存,保质期一年。Streptavidin -HRP 和 DAB Concentrate (20×) 需避光保存。 注意事项 1. 本产品仅限于专业人员的科学研究使用。 2. 请注意安全事项,遵守实验室试剂操作规范操作。 3. 洗涤过程应充分洗涤,否则会影响后续实验中酶的活性(如 DNase I 和TdT 酶)。用 PBS 清洗样本后,请用吸水纸吸干样本周围的液体。 4. 实验过程中请保持样本的湿润,防止干片造成的实验失败。 5. TdT 酶避免反复冻融,建议不要涡旋。 6. 本说明书中推荐的条件是通用的,用户可根据不同的样本类型和预实验的结果,对样本处理时间、试剂浓度等条件进行优化,选择最合适的实验条件。TUNEL In Situ Apoptosis Kit (HRP-DAB Method) E-CK-A331 - Elabscience Official Website
One-step TUNEL Flow Cytometry Apoptosis Kit (Green, FITC) E-CK-A420 一步法TUNEL流式凋亡检测试剂盒(绿色,FITC) 产品规格:20 Assays/50 Assays/100 Assays 产品简介 Elabscience® One-step TUNEL Flow Cytometry Apoptosis Kit 是一款灵敏度高且能快速简便地检测细胞凋亡的产品。本试剂盒可通过流式细胞仪来进行悬浮细胞、贴壁细胞的流式凋亡检测。 检测原理 细胞在发生凋亡时,会激活一些特异性的 DNA 内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组 DNA。使得凋亡细胞的 DNA 被切割成 180~200bp 片段,在琼脂糖凝胶上通常以 180~200bp 的阶梯状迁移。细胞经过固定破膜后,TdT酶(脱氧核糖核酸末端转移酶)将荧光标记的 dUTP 连接到细胞断裂 DNA 暴露的 3'-OH 末端,通过流式细胞仪检测 dUTP 偶联物发出的荧光信号,从而来检测晚期凋亡。 检测样本类型 - 悬浮细胞 - 贴壁细胞 保存条件 -20°C 保存,保质期一年。Labeling Solution 需避光保存,Labeling Solution、Fixation Buffer、Permeabilization Buffer 需避免反复多次冻融,建议分装保存。 注意事项 1. 本产品仅限于专业人员的科学研究使用。 2. 请注意安全事项,遵守实验室试剂操作规范操作。 3. 用于该试剂盒的检测样本最低细胞数目不低于 5×105 个。 4. 实验中需要重悬细胞的步骤,用移液器轻轻吹打细胞 10~20 次,吹打时请勿将枪头中的液体完全吹出,避免造成细胞损伤和产生过多的气泡。 5. 离心去上清的操作要小心谨慎,避免造成细胞损失。 6. Labeling Solution 和 TdT Enzyme 应避免反复冻融和涡旋操作。 One-step TUNEL Flow Cytometry Apoptosis Kit (Green, FITC) E-CK-A420 - Elabscience Official Website
One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Green, FITC) 一步法TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒(绿色,FITC)产品规格:20 Assays/50 Assays/100 Assays 产品简介 Elabscience® One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit 是一款灵敏度高且能快速简便的检测细胞凋亡的产品。本试剂盒适用于组织样本(石蜡切片、冰冻切片)和细胞样本(细胞涂片、细胞爬片)的原位凋亡检测,检测结果可通过荧光显微镜直接观察。 检测原理 细胞在发生凋亡时,会激活一些特异性的 DNA 内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。使得凋亡细胞的 DNA被切割成180~200bp片段,在琼脂糖凝胶上通常以 180~200bp 的阶梯状迁移。TdT 酶(脱氧核糖核酸末端转移酶)将标记的 dUTP 连接到断裂 DNA 暴露的 3'-OH 末端,通过在这些末端添加荧光 dUTP 的方式来标记晚期凋亡细胞,从而可以通过荧光显微镜进行检测。 检测样本类型 细胞爬片/涂片 石蜡切片 冰冻切片 保存条件 -20°C 可保存一年。Labeling Solution 和 DAPI Reagent(25 μg/mL) 需避光保存。注意事项 1. 本产品仅限于专业人员的科学研究使用。 2. 请注意安全事项,遵守实验室试剂操作规范操作。 3. 洗涤过程应充分洗涤,否则会影响后续实验中酶的活性(如 DNase I 和 TdT 酶)。用PBS 清洗样本后,请用吸水纸吸干样本周围的液体。 4. 实验过程中请保持样本的湿润,防止干片造成的实验失败。 5. 荧光标记液和 TdT 酶避免反复冻融,建议不要涡旋。 6. 本说明书中推荐的条件是通用的,用户可根据不同的样本类型和预实验的结果,对样本处理时间、试剂浓度等条件进行优化,选择最合适的实验条件。 One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Green, FITC) E-CK-A320 - Elabscience Official Website
Cell Counting Kit-8【保存条件】4℃避光保存一年有效,-20℃避光保存两年有效。【概述】Cell Counting Kit-8 试剂盒简称 CCK-8 试剂盒,可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试剂主要用途有:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。【使用方法(仅供参考)】1. 用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量。通常细胞增殖实验每孔加入 100μl 2×103个细胞,细胞毒性实验每孔加入 100μl 5×103个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定,推荐进行预实验选择合适的细胞数量)。按照实验需要,进行培养并给予 0-10μl 特定的药物刺激。2. 每孔加入 10μl CCK-8 溶液(如果起始的培养体积为 200μl,则需加入 20μl CCK-8 溶液,其它情况以此类推)。可以用加了相应体积细胞培养液和 CCK-8 溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测,需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8 溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。3. 在细胞培养箱内(37°C)继续孵育 0.5-4 小时,对于大多数情况孵育 1 小时即可。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在 0.5、1、2 和 4 小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续实验。4. 在 450nm 测定吸光度。可以使用吸光度在 430-490nm 之间的滤光片,但是 450 nm 滤光片的检测灵敏度最高。5. 计算方法细胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100%抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As:实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质)Ac:对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质)Ab:空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8)【注意事项】1. 初次实验可选择 3-5 个孔进行预实验选择合适的细胞数量。2. 由于使用 96 孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。一方面,由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的 PBS、水或培养液;另一方面,可以把 96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。3. 当有还原性物质存在时会影响 CCK- 8 的测定,增加 OD 值;在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生,减小 OD 值;在有酚红存在的情况下,会增加空白吸收,但不影响测定,扣除空白吸收即可。4. 在做加药实验时,如果药物具有还原性,就会和 CCK- 8 试剂发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入 CCK- 8,测定 450 nm 的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加 CCK-8) 的吸光度高,则证明药物有影响,可在加 CCK- 8 之前更换培养基,去掉药物的影响。5. 如果测定的 OD 值太低可适当增加细胞数量或延长加入 CCK-8 溶液后的染色时间。6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。7. 仅用于实验室,不适合农业/家庭/临床用途使用。8. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
BCA Protein Assay Kit【保存条件】 BCA 试剂 A 室温避光保存 1 年 BCA 试剂 B 室温保存 1 年 蛋白标准品-20℃保存 1 年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之 一 BCA 法研制而成, 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高,检测浓 度下限达到 25µg/ml,最小检测蛋白量达到 0.5µg,待测样品体积为 1-20µl。在 50-2000µg/ml 浓度范围内有 较好的线性关系。 BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达 5%的 SDS,5%的 Triton X-100,5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保 EDTA 低于 10mM,无 EGTA,二硫苏糖醇(DTT) 低于 1mM,β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不适用 BCA 法时建议试用本司生产的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制 BCA 工作液: 依据样品数量,将试剂 A 和试剂 B 按体积比 50:1 配制适量 BCA 工作液,并充分混匀。 注:配制 BCA 工作液前请将试剂 A 摇晃混匀,观察是否析出结晶,如若析出结晶,可 37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品: 蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,如果蛋白样品所在溶液不含有 干扰本试剂盒检测的物质,也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存,请完全融化并混匀后使用。具体如下表:3.蛋白浓度的检测a. 取 5µl 不同浓度蛋白标准加到 96 孔板的蛋白标准孔中。b. 取 5µl 样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 5µl,需加标准品稀释液补足到 5µl。请注意记录样品体积。c. 各孔加入 195µl BCA 工作液。 37℃放置 30 分钟。注:也可以室温放置 2 小时,或 60℃放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。d. 用酶标仪测定 A595,或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度,也可以在 2小时内测定,2 小时内检测数据无显著变化。4.数据计算a.以不同浓度的蛋白标准液为横坐标b. 以不同浓度的蛋白标准测得 OD 值(多孔则为平均 OD)为纵坐标c. 建立线性关系,获得公式(如右图中所示(本产品实际检测),若测得样品 OD=0.6 则 0.6=0.4995x+0.4151,计算得浓度 x=0.37mg/ml)【注意事项】1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 不同 96 板的吸收值会有不同,得到 OD 有区别为正常现象(保证数据呈线性关系)。3. 蛋白标准液(5mg/ml)收到后尽快分装,避免反复冻融。4. BCA 试剂 A 在低温环境下会析出结晶,可适当 37℃水浴促溶后使用。5. 请使用 96 孔底部透明板(如普通细胞培养板)检测,最佳波长为 595nm。