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高效Western封闭液
基本售价：240.00元
Western高效封闭液货号规格GF1815500 ml/瓶u 产品简介在常规的Western blot和ELISA实验中，需要用封闭试剂将膜或酶标板孔中的未被抗原或抗体占据的位点进行封闭，通常的封闭试剂有BSA，脱脂奶粉等，但是BSA中有少量的抗体残留，导致抗原/抗体之间的交叉反应，从而产生高背景，杂带多，或本底水平增高等影响。同样脱脂奶粉中含有少量的生物素和碱性磷酸酶残留，在使用生物素-亲和素系统和碱性磷酸酶标记的二抗时，也会使得背景高或本底水平增高，脱脂奶粉中含有的酪蛋白和碱性磷酸酶残留也使得其不适用于磷酸化蛋白的检测。本产品采用化学合成的高分子聚合物作为核心封闭试剂，能够避免BSA、脱脂奶粉等动物源性蛋白作为封闭试剂的缺陷，提高实验结果的精确性，增加条带清晰度；本封闭液不会干扰辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)标记二抗的检测，同时也不影响基于生物素的检测；本封闭剂不与蛋白产生非特异性结合，只封闭膜而不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点，提高了抗体检测灵敏度。封闭时间仅需十分钟，大大缩短了实验过程，节省了宝贵实验时间。u 产品特色：Ø 即用型封闭液，可直接使用，4℃保质两年；Ø 封闭时间短，仅需10分钟；Ø 减少高背景和非特异性免疫反应，增强条带清晰度；Ø 适合磷酸化特异抗体及生物素检测系统；Ø 不含磷酸盐、叠氮钠或硫柳汞类有毒防腐剂。u 运输和保存条件：常温运输，4℃存储，有效期两年。u 操作步骤：1、 完成转膜后，将膜移入到平皿或者其他适合的容器中。2、 根据膜的大小，在平皿或者其它适当容器中倒入一定体积的封闭液，确保封闭液能充分覆盖膜即可。3、 置于水平摇床上，室温条件下振荡孵育10分钟左右。4、 封闭后的膜即可用于一抗孵育等后续Western Blot实验。u 注意事项Ø 通常用于PVDF膜或NC膜的封闭时间为10分钟。对于背景低的抗体，可以缩短到5分钟，而对于一些背景非常高的抗体，可以尝试将封闭时间延长为30-60分钟。Ø 信号弱或无信号：可能是上样量不足，转膜效率低，抗体效价低、特异性差等原因造成；背景过高：可能是抗体使用量过多，试剂或仪器设备被污染等原因造成。Ø 由于没有任何一种封闭液是适用于所有实验体系的，因此对于一些特殊的实验或抗体，请根据抗体说明书及实验具体情况，选用合适类型的封闭液。Ø 本产品不含叠氮钠、硫柳汞类防腐剂，但含安全性更高的医疗类防腐剂，使用时还需小心操作避免皮肤直接接触。
通用型抗体稀释液
基本售价：790.00元
产品介绍：通用型抗体稀释液是一种即用型的，适合于稀释所有免疫抗体测定（Immunofluorescence, IHC, ELISA, WB）实验中的抗体。该试剂可用于一抗或二抗的稀释和配制，在4℃保存和使用不少于六个月。稀释液中加入了多种抗体结合反应增强剂及稳定剂，能够增加抗体的溶解度和稳定性，增强免疫反应，降低非特异的背景颜色，提高实验的特异性和灵敏度。可反复使用，节约宝贵的抗体。试剂中不含有动物源的蛋白、磷酸盐、叠氮钠或硫柳汞类防腐剂，适合于所有类型抗体稀释，包括HRP，AP标记的抗体。产品特色：1.即用型稀释液，无需配制2.稀释后的抗体可以使用长达6个月3.适用所有实验的抗体稀释（IF、IHC、ELISA、WB）4.含抗体结合反应增强剂、稳定剂，效果更佳5.不含 BSA、脱脂奶粉等动物源蛋白6.不含磷酸盐、叠氮钠或硫柳汞类防腐剂 运输和保存条件：常温运输，4℃存储，有效期两年。使用说明：1.根据抗体使用说明书，直接用本品对一抗或二抗进行适当倍数的稀释。2.保存在抗体稀释液中的抗体可回收于4℃保存，可反复使用多次，长达6 个月以上，直至不能达到理想结果后丢弃。注意事项：1.使用后请旋紧瓶盖，防止溶液挥发或与空气的物质发生化学反应，并放回4℃保存。2.在进行抗体免疫反应前可以使用Genefist的无蛋白封闭液（货号GF1813）进行封闭，能进一步提高条带的清晰度，减少显色后的高背景和杂带的产生 。3.本品不含叠氮钠或硫柳汞类防腐剂，但含安全性更高的防腐剂，还需小心操作避免皮肤直接接触。4. 本试剂只能用于科研实验，请勿用于临床诊断和其它用途。
5X蛋白上样缓冲液（还原型）
基本售价：50.00元
产品简介： SDS-PAGE 上样缓冲液(SDS-PAGE Loading Buffer, 5X)，是一种经过改良的以溴酚蓝为染料，5 倍浓缩的蛋白上样缓冲液，用于 SDS-PAGE 时蛋白样品的上样操作。本产品不含传统的 β-巯基乙醇或 DTT，采用 TCEP作为还原剂，稳定性更好、还原效果更高，并且无难闻气味！由于含有变性剂，本产品不适用于非变性胶的电泳。 保存条件： -20℃保存，至少两年有效。 使用说明： 1、 在 37℃水浴中溶解蛋白上样缓冲液。 注意： Loading buffer 里含有大量甘油，有助于样品沉淀至加样孔底部，低温下试剂组分在甘油里容易析出，使用前一定要确保蛋白上样缓冲液充分溶解。 2、 按照每 4ul 蛋白样品加入 1ul 上样缓冲液的比例，混合蛋白样品和上样缓冲液。 3、 100℃或沸水浴加热 5-10 分钟，以充分变性蛋白。 注意：如果起始时细胞或组织的用量较大，基因组 DNA 含量较高，煮沸 5-10 分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体，此时需要延长煮沸时间，或者加入适量稀释成 1X 的蛋白上样缓冲液再煮 3-5 分钟。充分煮沸可以使结合在基因组 DNA 上的蛋白充分释放，同时会导致基因组 DNA 的部分断裂，从而使粘稠感消失，这样就不会影响后续的上样操作。 4、 冷却到室温后，离心取上清上样到 SDS-PAGE 胶加样孔内，开始电泳。 5、 通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近，即可停止电泳。 注意事项： 由于含有变性剂，本品不适用于非变性胶的电泳 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(5X)必须完全溶解后再使用。 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
RNAstore样本保存液
基本售价：1296.00元
储存条件 室温（15-25℃）可稳定保存1年以上。低温贮存可能会产生沉淀或晶体析出，用之前需37℃完全溶解沉淀。 产品介绍 RNAstore是一种液态的、无毒的组织保存试剂。它能迅速渗入组织细胞中，通过抑制RNase活性从而保护非冷冻细胞RNA于原位，使其更适合于组织基因表达谱的分析。获得组织块后，迅速浸泡在RNAstore中保存，而不会引起RNA的降解，这样可以不必马上处理样本，也不必将样本冷冻在液氮之中。RNAstore可广泛应用于多种脊椎动物样本。包括脑、心、肾、脾、肝、肺和胸腺。 推荐不同组织样品的RNAstore使用量： 注意事项 1.RNAstore只能用于新鲜组织，在浸入RNAstore之前不能冷冻组织。 2.要求组织样本任何一边的最大厚度不能大于0.5 cm, 然后将组织块放入到10倍体积的RNAstore中保存。如果组织样品厚度过大，RNAstore渗入组织样本中的速度将会减慢造成RNA降解。所以如果厚度超过0.5 cm需简单切碎组织后再在RNAstore中贮存。 操作步骤 1.切割组织前估计加入RNAstore中的组织重量，并根据加入至少10倍体积组织的量确定RNAstore的使用量（举例：组织100 mg需1 ml RNAstore） 2.切割组织后放入RNAstore中。如果组织样本过大需剪切成任何一边的最大厚度不能大于0.5 cm。 注意：为完全有效的保护组织样本，该组织样本应完全浸没入RNAstore中并且组织样本的任何一边的最大厚度不应超过0.5 cm。 3.贮存于RNAstore中的样品组织4℃可至少保存1个月、室温1周和37℃ 1天。对于-20℃或-80℃长期保存，先将样本在4℃条件下过夜渗透，然后将组织从RNAstore中取出后放入-20℃或-80℃长期保存。样本可随后在室温下解冻及再冻存，其RNA的质和量都不会受影响。 注意：建议组织样品在RNAstore中低温保存 (4℃可至少保存1个月，-20℃或-80℃长期保存)，不建议37℃或室温保存。冻存于-20℃或-80℃的组织可反复冻融至少20次不影响RNA提取。保存于RNAstore中的组织如果需要长途运输，运输过程中需要确保组织完全浸入RNAstore中。 4.从RNAstore中取出样品就可以用RNA提取的试剂盒 (Trizol,RNAprepPure, RNAsimple)直接提取RNA。 其它应用 1.该试剂不适合于保存植物叶片，其表面的腊表皮使RNAstore很难完全渗入组织中。 2.对于组织培养细胞的操作，先沉淀细胞，用PBS洗一次，再用少量的PBS悬浮细胞，后加2倍体积的RNAstore保存。后续RNA的提取可以采用直接离心去除RNAstore后进行RNA提取，也可以不用去除RNAstore直接加入RNA提取裂解液进行直接提取。 离心法：因为RNAstore的介质浓度比典型的细胞培养介质的浓度高，因此用通常沉淀活细胞的离心力无法沉淀RNAstore中的细胞。离心沉淀细胞，去除RNAstore。（HeLa细胞大约需要3000×g，但其他细胞可能不能容忍这个速度，或者他们需要更大的离心力。） 直接提取法：通过向细胞混合物中加入10倍体积的RNA提取试剂来完成。 3.对于细菌的操作，先离心收集细菌，用PBS洗一次，再用少量的PBS悬浮细胞，加入2倍体积的RNAstore保存。后续RNA的提取参照组织细胞的提取步骤。大肠杆菌保存在RNAstore中4℃条件下1个月仍很完整，产生不降解的RNA。 4.对于全血中白细胞的保存，需将白细胞从红细胞和血清中分离出来，并按组织培养细胞一样处理后，白细胞便能有效地保存在RNAstore中。不要将全血、血浆或血清中的RNA保存在RNAstore中，因为它们蛋白含量过高，与RNAstore混合后易形成不溶的沉淀。
多糖多酚植物总RNA提取试剂盒
基本售价：1184.00元
储存条件 “裂解液RS” 和 “DNase I”，储存于-20℃；其他试剂室温（15-25℃）保存。 产品简介 本试剂盒所含“裂解液 RS”，采用我司独特的“SDS/抗氧化”的方式，可适用于广泛的植物组织，包含草本植物与本本植物的叶片、具高粘性的多糖多酚类及种子胚乳的植物样本；此提取方案，增加了额外步骤去除多酚和多糖，RNA 的提取总量更高。提取的总 RNA 纯度高，基本没有基因组、蛋白和其它杂质的污染，可用于 PCR、Blot、分子克隆等多种下游实验。 预防RNase污染，应注意以下几方面 1.经常更换新手套，因为皮肤带有细菌，可能导致RNase污染;使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。 2.RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水清洗再灭菌，即可去除RNase。 3.配制溶液应使用无RNase的水（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(V/V)，高压灭菌）。 使用前注意事项 1.裂解液 RS：使用前请于 50℃水浴将裂解液完全回溶，并添加 450ul 巯基乙醇；添加过巯基乙醇的裂解液 RS 继续保存于-20℃（建议将添加过巯基乙醇的裂解液 RS 于无酶管分装成小量，再保存于-20℃）。 2.溶液 BC：使用前请添加 30ml 无水乙醇。 3.漂洗液 PW：使用前请添加 64ml 无水乙醇。 4.为确保 RNA 的品质及产量，应尽量收取新鲜的动物组织进行 RNA 提取，或将组织立即以液氮冷冻，储存于-70℃，组织亦可保存在 RANstore 样本保存液（目录号：TR38）中。 5.凤梨和兰花推荐采用“裂解液 RL”（kit 产品目录 TR02） 操作步骤 1.匀浆处理：50-100 mg 植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末，加入 450 μl 裂解液 RS（使用前请先检查是否已加入 β-巯基乙醇），立即涡旋剧烈震荡混匀，并于 56℃孵育 5-10 分钟，每隔一段时间可翻转混合离心管。 注意：由于植物多样性非常丰富，而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的 RNA 含量都不相同，请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。 2.加入 150ul 的溶液 GP 至裂解液中，混合均匀，于冰上孵育 5 分钟，12,000rpm(~13,400×g)离心 5 min。 注意：溶液会呈现雾状，为界面活性剂、蛋白质、多糖及二次代谢物的沉淀物。 3.移取上清液至过滤柱 CS1 上(过滤柱 CS1 放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min。 4.小心吸取收集管中的上清至新的 RNase-Free 离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。 5.向溶液中加入 1.5 倍体积的溶液 BC（已添加无水乙醇）,以震荡或移液器吸吐混合均匀。 注意：加入溶液 BC 后会形成丝状沉淀物，不影响 RNA 提取。 6.移取混合液（连同沉淀物一起）至吸附柱 CR1（吸附柱 CR1 放在收集管中），12,000 rpm(~13,400×g) 离心1 min，丢弃滤液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 注意：如果混合液体积大于吸附柱容量，可以分次完成。 7.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW，12,000rpm(~13,400×g)离心 1min，丢弃滤液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 8.DNase Ⅰ降解。 每一纯化反应，请将 80 ul DNase 消化液与 10ul DNaseⅠ预先混合在新的离心管(轻弹或翻转离心管以混合均匀，请勿震荡)，将 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室温（25~28℃）孵育 15 分钟。 注意：如同时操作多组样本，请使用前现配新鲜的 DNaseⅠ工作液,请勿预先配制保存 DNaseⅠ工作液。 9.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR1 放回收集管中。 10.向吸附柱 CR1 中加入 600 μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g) 离心 1 min，丢弃滤液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 11.重复操作步骤 10。 12.12,000rpm(~13,400×g)离心 3 min，将吸附柱 CR1 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附柱中残余的乙醇。 注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱 CR1 在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的 RT 等实验。 13.将吸附柱 CR1 转入一个新的 RNase-Free 离心管中，加入 30-100 μl 无酶双蒸水至吸附柱的膜中心，室温静置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，得到 RNA 溶液。 注意：洗脱液体积不应少于 30μl，体积过小影响回收效率。为了增加产量，可将步骤 13 得到的 RNA 溶液再加入吸附柱 CR1，放置2min，12,000rpm(~13,400×g)离心 1min，得到 RNA 溶液。RNA 溶液-70℃中保存。 附录：从高度黏稠性的富含多酚及多糖成分的样本中提取 RNA 樟科植物样本，在裂解后粘稠度高、移取困难，可直接于过滤柱中进行裂解，以减少移液器吸取的步骤。 1.将过滤柱 CS1 于冰上预冷，秤取不超过 30mg 的样本组织，于液氮中迅速研磨，并将研磨的样本直接转移至预冷的过滤柱 CS1 里（过滤柱 CS1 放在收集管中）。 2.加入 600ul 裂解液 RS(已添加巯基乙醇)至过滤柱，于 60℃金属浴孵育 10 分钟。 3.12,000 rpm(~13,400×g)离心 5 min，将收集管中的滤液移取至新的 1.5ml 离心管，请避免吸取到沉淀物。 注意：有些样本可能会堵塞过滤柱，可再次离心，或将管柱中剩余的裂解液移至新的过滤柱 CS1 再次离心。 4.加入 1/3 倍体积的溶液 GP 至滤液中，混合均匀，于冰上孵育 5 分钟，12,000 rpm(~13,400×g)离心离心 5min，将上清液小心转移至新的 1.5ml 离心管，不要触碰或移取固体沉淀。转至上面“操作步骤 5”。
动物组织总RNA提取试剂盒
基本售价：1104.00元
储存条件 “DNase I（DNase I 冻干粉溶解于专用保存液）”，储存于-20℃； 其他试剂室温（15-25℃）保存。 产品简介 动物组织总RNA提取试剂盒提供了快速简单且有效的方法，可从各种动物组织中提取总RNA。本试剂盒采用离心管柱的方式，配合使用我司独特的硫氰酸胍裂解液，使组织裂解及均质化，并加入乙醇使RNA选择性的与管柱膜结合，于操作过程中加入DNase Ⅰ以去除残留的基因组DNA，经过多次“洗涤及离心”的步骤去除污染杂质，再以无核酸酶水回收结合在管柱膜上的RNA。若RNA小于200nt,如5sRNA、tRNA和microRNA,无法在此系统中被有效地回收。提取的总RNA纯度高，基本没有DNA和蛋白质污染，可用于PCR、芯片分析、Blot、PolyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆等多种下游实验。 预防RNase污染，应注意以下几方面 1.经常更换新手套，因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。 2.使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。 3.RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。 4.配制溶液应使用无RNase的水（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(V/V)，高压灭菌）。 使用前注意事项 1.裂解液 RL：使用前请添加 300ul 巯基乙醇，添加过巯基乙醇的裂解液 4℃保存。 2.漂洗液 PW：使用前请添加 64ml 无水乙醇。 3.为确保 RNA 的品质及产量，应尽量收取新鲜的动物组织进行 RNA 提取，或将组织立即以液氮冷冻，储存于-70℃，组织亦可保存在 RANstore 样本保存液（目录号：TR38）中。样本保存在 RNAstore 试剂中，可于37℃存放 1 天、4℃存放 1 个月、-20℃永久保存，所提取的 RNA 品质与储存在液氮中相同。 操作步骤 1.匀浆处理： 每 10-20 mg 组织加 300 μl 裂解液 RL（使用前请先检查是否已加入 β-巯基乙醇），用研磨杵将组织彻底研磨（如组织较难彻底研磨，可选用电动或玻璃匀浆器）；随后向匀浆液 中加入 590 μl RNase-Free ddH2O 和10 μl Proteinase K，混匀后 56℃处理 10-20 min。 注意：组织量一定不要超过 20 mg，否则将导致 RNA 得率和质量下降。 2.将裂解混合液转移至过滤柱 CS1(过滤柱 CS1 放入收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2min，收集滤液。 3.向滤液加入 0.5 倍上清体积的无水乙醇，均匀（此时可能会出现沉淀）。 4.将所得“裂解液/乙醇混合液”（含沉淀），移取至吸附柱 CR1 中（吸附柱 CR1 放入收集管中），12,000 rpm(~13,400×g )离心 30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 注意：将溶液和沉淀转移至吸附柱 CR1 时，如果体积大于吸附柱容量，可以分次完成。 5.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW，12,000 rpm (~13,400×g )离心离心 1 min，丢弃滤液，将吸附柱CR1 放回收集管中。 6.DNase Ⅰ降解。 每一纯化反应，请将 80 ul DNase 消化液与 10ul DNaseⅠ预先混合在新的离心管(轻弹或翻转离心管以混合均匀，请勿震荡)，将 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室温（25~28℃）孵育15 分钟。 注意：如同时操作多组样本，请使用前现配新鲜的 DNaseⅠ工作液,请勿预先配制保存 DNaseⅠ工作液。 7.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 8.向吸附柱 CR1 中加入 600μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g) 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 9.重复操作步骤 8。 10.12,000 rpm(~13,400×g)离心 3 min，将吸附柱 CR1 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。 注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱 CR1 在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的 RT 等实验。 11.将吸附柱 CR1 转入一个新的 RNase-Free 离心管中，加入 30-100 μl 无酶双蒸水至吸附柱的膜中心，室温静置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，得到 RNA 溶液。 注意：洗脱缓冲液体积不应少于 30 μl，体积过小影响回收效率；RNA 溶液请于-70℃保存。
培养细胞/细菌总RNA提取试剂盒
基本售价：1024.00元
选配的试剂溶菌酶（50mg/ml）目录号：GF0203-01，客户自备，提取细菌总 RNA 时需配备储存条件DNase I（为DNase I 冻干粉溶解于专用保存液），储存于-20℃；其他试剂室温（15-25℃）保存。产品简介培养细胞/细菌总RNA提取试剂盒，提供了快速简单且有效的方法，可从培养细胞和细菌中提取总RNA。本试剂盒采用离心管柱的方式，配合使用我司独特的硫氰酸胍裂解液，使细胞或细菌裂解及均质化，并加入乙醇使RNA选择性的与管柱膜结合，于操作过程中加入DNase Ⅰ以去除残留的基因组DNA，经过多次“洗涤及离心”的步骤去除污染杂质，再以无核酸酶水回收结合在管柱膜上的RNA。若RNA小于200nt,如5sRNA、tRNA和microRNA,无法在此系统中被有效地回收。提取的总RNA纯度高，基本没有DNA和蛋白质污染，可用于PCR、芯片分析、Blot、PolyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆等多种下游实验。预防RNase污染，应注意以下几方面1.经常更换新手套，因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。2.使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。3.RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。4.配制溶液应使用无RNase的水（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(V/V)，高压灭菌）。使用前注意事项1.裂解液 RL：使用前请添加 300ul 巯基乙醇，添加过巯基乙醇的裂解液 4℃保存。2.漂洗液 PW：使用前请添加 64ml 无水乙醇。3.为确保 RNA 的品质及产量，应尽量收取新鲜的动物组织进行 RNA 提取，或将组织立即以液氮冷冻，储存于-70℃，组织亦可保存在 RANstore 样本保存液（目录号：TR38）中。样本保存在 RNAstore 试剂中，可于37℃存放 1 天、4℃存放 1 个月、-20℃永久保存，所提取的 RNA 品质与储存在液氮中相同。操作步骤一、从培养细胞中提取总 RNA1.收集细胞a.悬浮细胞的收集（收集细胞数量请不要超过 1×107）：估计细胞数量，300×g 离心 5 min，将细胞收集到离心管中，仔细吸除所有培养基上清。b.单层贴壁细胞的收集（收集细胞数量请不要超过 1×107）：可直接在培养容器中裂解（容器直径不超过10 cm），或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。（在摇瓶中培养的单层贴壁细胞通常采用胰蛋白酶处理的方法。）直接裂解法：确定细胞数量，彻底吸除细胞培养基上清，立即进行第 2 步裂解步骤。胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用 PBS 洗涤细胞，吸除 PBS，向细胞中加入含有0.10-0.25%胰蛋白酶的 PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至 RNase-Free 的离心管中，300×g 离心 5 min，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清。注意：收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，影响 RNA 与吸附柱的结合，造成 RNA 的产量降低;请勿使用过多的样本量，避免管柱杜塞而造成 RNA 的产量降低。2.裂解处理a.对于离心得到的细胞沉淀：轻弹离心管底部，使细胞沉淀松散，加入适量裂解液 RL（详见下表，使用3.将所有溶液转移至过滤柱 CS1 上(过滤柱 CS1 放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2min，收集滤液。4.向滤液加入等体积 70%乙醇至裂解液中，混匀（此时可能会出现沉淀）。5.将“裂解液/乙醇混合液”（含沉淀）移取至吸附柱 CR1 中（吸附柱 CR1 放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g )离心 30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。注意：将溶液和沉淀转移至吸附柱 CR1 时，如果体积大于吸附柱容量，可以分次完成。6.向吸附柱 CR1 加入 500ul 溶液 RW，12,000 rpm (~13,400×g )离心离心 1 min，丢弃滤液。7.DNase Ⅰ降解。每一纯化反应，请将 80 ul DNase 消化液与 10ul DNaseⅠ预先混合在新的离心管(轻弹或翻转离心管以混合均匀，请勿震荡)，将 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室温（25~28℃）孵育15 分钟。注意：如同时操作多组样本，请使用前现配新鲜的 DNaseⅠ工作液,请勿预先配制保存 DNaseⅠ工作液。8.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。9.向吸附柱 CR1 中加入 600μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g) 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。10.重复操作步骤 9。11.12,000 rpm(~13,400×g)离心 3 min，将吸附柱 CR1 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱 CR1 在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的 RT 等实验。12.将吸附柱 CR1 转入一个新的 RNase-Free 离心管中，加入 30-100 μl 无酶双蒸水至吸附柱的膜中心，室温静置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，得到 RNA 溶液。注意：洗脱缓冲液体积不应少于 30 μl，体积过小影响回收效率；RNA 溶液请于-70℃保存。二、从细菌中提取总 RNA1.4℃12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min 收集菌体（收集菌体的最大量不超过 1×109），仔细去除所有培养基上清，以后的所有离心步骤均在室温（20-25℃）进行。注意：如果培养基上清去除不完全，将对第二步中的细胞壁消化过程产生抑制。2.用含有溶菌酶的 100μl TE 缓冲液（客户自己配制，配制方法见下表）彻底重悬菌体，孵育时间见下表。3.加入 350μl 裂解液 RL（使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），涡旋振荡混匀。 4.将裂解混合液转移至过滤柱 CS1 上(过滤柱 CS1 放入收集管)，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2min，收集滤液。 5.向滤液中加入 250μl 无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀）。 6.将“裂解液/乙醇混合液”（含沉淀）移取至吸附柱 CR1 中（吸附柱 CR1 放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g )离心 30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 注意：将溶液和沉淀转移至吸附柱 CR1 时，如果体积大于吸附柱容量，可以分次完成。 7.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW，12,000 rpm (~13,400×g )离心离心 1 min，丢弃滤液，将吸附柱CR1 放回收集管中。 8.DNase Ⅰ降解。 每一纯化反应，请将 80 ul DNase 消化液与 10ul DNaseⅠ预先混合在新的离心管(轻弹或翻转离心管以混合均匀，请勿震荡)，将 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室温（25~28℃）孵育15 分钟。 注意：如同时操作多组样本，请使用前现配新鲜的 DNaseⅠ工作液,请勿预先配制保存 DNaseⅠ工作液。 9.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 10.向吸附柱 CR1 中加入 600μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 11.重复操作步骤 10。 12.12,000 rpm(~13,400×g)离心 3 min，将吸附柱 CR1 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。 注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱 CR1 在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的 RT 等实验。 13.将吸附柱 CR1 转入一个新的 RNase-Free 离心管中，加入 30-100 μl 无酶双蒸水至吸附柱的膜中心，室温静置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，得到 RNA 溶液。 注意：洗脱缓冲液体积不应少于 30 μl，体积过小影响回收效率；RNA 溶液请于-70℃保存。
植物总RNA提取试剂盒
基本售价：1184.00元
储存条件 “裂解液RS” 和 “DNase I（DNase I 冻干粉溶解于专用保存液）”，储存于-20℃。其他试剂室温（15-25℃）保存。 产品简介 由于植物的细胞结构和代谢活性在物种、组织类型和发育阶段之间可能存在显著差异，因此没有一种通用的裂解溶液或独特的方法可以同样适用于所有植物样品。本试剂盒包含两种可供选择的裂解缓冲液系统：裂解缓冲液 RL（含硫氰酸胍）和裂解缓冲液 RS(含 SDS/抗氧化剂)，适用于各种植物和真菌样品。“裂解液RL”含硫氰酸胍，此提取方案适用于大部分的植物组织，操作简单快速，但它不适用于富含淀粉、多酚类及多糖类的样本，因为裂解液RL加入上述样本后，会使样本变非常粘稠甚至凝固。 “裂解液RS”，采用我司独特的“SDS/抗氧化”的方式，可适用于广泛的植物组织，包含草本植物与本本植物的叶片、具高粘性的多糖多酚类及种子胚乳的植物样本，此提取方案，增加了额外步骤去除多酚和多糖，RNA的提取总量更高。 本试剂盒提取的总 RNA 纯度高，基本没有基因组、蛋白和其它杂质的污染，可用于 PCR、Blot、分子克隆等多种下游实验。 预防RNase污染，应注意以下几方面 1.经常更换新手套，因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。 2.使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。 3.RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。 4.配制溶液应使用无RNase的水（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(V/V)，高压灭菌）。 使用前注意事项 1.裂解液 RL：使用前请添加 300ul 巯基乙醇，添加过巯基乙醇的裂解液 4℃保存。 2.裂解液 RS：使用前请于 50℃水浴将裂解液完全回溶，并添加 450ul 巯基乙醇；添加过巯基乙醇的裂解液RS 继续保存于-20℃（建议将添加过巯基乙醇的裂解液 RS 于无酶管分装成小量，再保存于-20℃）。 3.溶液 BC：使用前请添加 30ml 无水乙醇。 4.漂洗液 PW：使用前请向添加 64ml 无水乙醇。 5.为确保 RNA 的品质及产量，应尽量收取新鲜的动物组织进行 RNA 提取，或将组织立即以液氮冷冻，储存于-70℃，组织亦可保存在 RANstore 样本保存液（目录号：TR38）中。 6.凤梨和兰花推荐采用“裂解液 RL”。 操作步骤 一、裂解液 RL 操作步骤： 1.匀浆处理 50-100 mg 植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末，加入 450ul RL（使用前请先检查是否已加入 β-巯基乙醇），涡旋剧烈震荡混匀，并于 56℃孵育 3 分钟。 注意 1：在 56℃孵育 1-3 min 将有助于植物组织裂解，但是对于某些富含淀粉的样品，请不要加热处理，防止因淀粉引起的样品膨胀现象。 注意 2：由于植物多样性非常丰富，而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的 RNA 含量都不相同，请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。 2.将所有溶液转移至过滤柱 CS1 上(过滤柱 CS1 放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2-5 min，小心吸取收集管中的上清至 RNase-Free 的离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。 注意：由于裂解液较粘稠，所以将溶液转移至过滤柱时，可以剪去部分吸头末端。 3.缓慢加入 0.5 倍上清体积的无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀），转至“RNA 提取”步骤。 4.将所得“裂解液/乙醇混合液”（含沉淀），移取至吸附柱 CR1 中（吸附柱 CR1 放入收集管中），12,000 rpm(~13,400×g )离心 30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 注意：将溶液和沉淀转移至吸附柱 CR1 时，如果体积大于吸附柱容量，可以分次完成。 5.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW，12,000 rpm (~13,400×g )离心离心 1 min，丢弃滤液,将吸附柱CR1 放回收集管中。 6.DNase Ⅰ降解。 每一纯化反应，请将 80 ul DNase 消化液与 10ul DNaseⅠ预先混合在新的离心管(轻弹或翻转离心管以混合均匀，请勿震荡)，将 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室温（25~28℃）孵育15 分钟。 注意：如同时操作多组样本，请使用前现配新鲜的 DNaseⅠ工作液,请勿预先配制保存 DNaseⅠ工作液。 7.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 8.向吸附柱 CR1 中加入 600μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g) 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 9.重复操作步骤 8。 10.12,000 rpm(~13,400×g)离心 3 min，将吸附柱 CR1 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余 的乙醇。 注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱 CR1 在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的 RT 等实验。 11.将吸附柱 CR1 转入一个新的 RNase-Free 离心管中，加入 30-100 μl 无酶双蒸水至吸附柱的膜中心，室温静置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，得到 RNA 溶液。 注意：洗脱缓冲液体积不应少于 30 μl，体积过小影响回收效率；RNA 溶液请于-70℃保存。 二、裂解液 RS 操作步骤 1.匀浆处理：50-100 mg 植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末，加入 450 μl 裂解液 RS（使用前请先检查是否已加入 β-巯基乙醇），立即涡旋剧烈震荡混匀，并于 56℃孵育 5-10 分钟，每隔一段时间可翻转混合离心管。 注意：由于植物多样性非常丰富，而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的 RNA 含量都不相同，请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。 2.加入 150ul 的溶液 GP 至裂解液中，混合均匀，于冰上孵育 5 分钟，12,000rpm(~13,400×g)离心 5 min。 注意：溶液会呈现雾状，为界面活性剂、蛋白质、多糖及二次代谢物的沉淀物。 3.移取上清液至过滤柱 CS1 上(过滤柱 CS1 放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min。 4.小心吸取收集管中的上清至新的 RNase-Free 离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。 5.向溶液中加入 1.5 倍体积的溶液 BC（已添加无水乙醇）,以震荡或移液器吸吐混合均匀。 注意：加入溶液 BC 后会形成丝状沉淀物，不影响 RNA 提取。 6.移取混合液（连同沉淀物一起）至吸附柱 CR1（吸附柱 CR1 放在收集管中），12,000 rpm(~13,400×g) 离心 1 min，丢弃滤液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 注意：如果混合液体积大于吸附柱容量，可以分次完成。 7.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW，12,000rpm(~13,400×g)离心 1min，丢弃滤液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 8.DNase Ⅰ降解。 每一纯化反应，请将 80 ul DNase 消化液与 2ul DNaseⅠ预先混合在新的离心管(轻弹或翻转离心管以混合均匀，请勿震荡)，将 82 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室温（25~28℃）孵育15 分钟。 注意：如同时操作多组样本，请使用前现配新鲜的 DNaseⅠ工作液,请勿预先配制保存 DNaseⅠ工作液。 9.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 10.向吸附柱 CR1 中加入 600 μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，丢弃滤液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。 11.重复操作步骤 10。 12.12,000rpm(~13,400×g)离心 3 min，将吸附柱 CR1 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附柱中残余的乙醇。 注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱 CR1 在室温放置片刻，以充分晾干。 如果有漂洗液残留，可能会影响后续的 RT 等实验。 13.将吸附柱 CR1 转入一个新的 RNase-Free 离心管中，加入 30-100 μl 无酶双蒸水至吸附柱的膜中心，室 温静置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，得到 RNA 溶液。 注意：洗脱液体积不应少于 30μl，体积过小影响回收效率。为了增加产量，可将步骤 13 得到的 RNA 溶液再加入吸附柱 CR1，放置 2min，12,000rpm(~13,400×g)离心 1min，得到 RNA 溶液。RNA 溶液-70℃中保存。 附录：从高度黏稠性的富含多酚及多糖成分的样本中提取 RNA 樟科植物样本，在裂解后粘稠度高、移取困难，可直接于过滤柱中进行裂解，以减少移液器吸取的步骤。 1.将过滤柱 CS1 于冰上预冷，秤取不超过 30mg 的样本组织，于液氮中迅速研磨，并将研磨的样本直接转移至预冷的过滤柱 CS1 里（过滤柱 CS1 放在收集管中）。 2.加入 600ul 裂解液 RS(已添加巯基乙醇)至过滤柱，于 60℃金属浴孵育 10 分钟。 3.12,000 rpm(~13,400×g)离心 5 min，将收集管中的滤液移取至新的 1.5ml 离心管，请避免吸取到沉淀物。 注意：有些样本可能会堵塞过滤柱，可再次离心，或将管柱中剩余的裂解液移至新的过滤柱 CS1 再次离 心。 4.加入 1/3 倍体积的溶液 GP 至滤液中，混合均匀，于冰上孵育 5 分钟，12,000 rpm(~13,400×g)离心离心 5 min，将上清液小心转移至新的 1.5ml 离心管，不要触碰或移取固体沉淀。转至上面“操作步骤5”。
总RNA提取试剂盒
基本售价：1024.00元
选配的试剂蛋白酶K（20mg/ml）目录号：GF0202-01，客户自备，提取动物组织总RNA时需配备 溶菌酶（50mg/ml）目录号：GF0203-01，客户自备，提取细菌总RNA 时需配备储存条件DNase I溶液（DNase I 冻干粉溶解于专用保存液），储存于-20℃，可反复冻融； 其他试剂室温（15-25℃）保存。产品简介总RNA提取试剂盒提供了快速简单且有效的方法，可从各种动物组织、培养细胞及细菌、植物组织、 中提取总RNA。本试剂盒采用离心管柱的方式，配合使用我司独特的硫氰酸胍裂解液，使组织或细胞裂解 及均质化，并加入乙醇使RNA选择性的与管柱膜结合，于操作过程中加入DNase Ⅰ以去除残留的基因组DNA，经过多次“洗涤及离心”的步骤去除污染杂质，再以无核酸酶水回收结合在管柱膜上的RNA。若RNA 小于200nt,如5sRNA、tRNA和microRNA,无法在此系统中被有效地回收。提取的总RNA纯度高，基本没有DNA 和蛋白质污染，可用于PCR、芯片分析、Blot、PolyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆等多种下游实验。本试剂盒同样适用酵母，可以从酵母菌中提取总RNA,具体操作方法见“附录Ⅰ”。本试剂盒也可用于将以其他方法提取的 RAN 进行clean up 或去除基因组DNA 污染，详见“附录Ⅱ”。预防RNase污染，应注意以下几方面1. 经常更换新手套，因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。2. 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。3. RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。4. 配制溶液应使用无RNase的水（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(V/V)，高压灭菌）。 使用前注意事项1. 使用前请向裂解液RL 添加 350ul 巯基乙醇，添加过巯基乙醇的裂解液 4℃保存。2. 使用前请向漂洗液PW 添加 64ml 无水乙醇。3. 为确保RNA 的品质及产量，应尽量收取新鲜的动物组织进行 RNA 提取，或将组织立即以液氮冷冻，储存于-70℃，组织亦可保存在RANstore 样本保存液（目录号：TR38）中。样本保存在 RNAstore 试剂中，可于37℃存放 1 天、4℃存放 1 个月、-20℃永久保存，所提取的 RNA 品质与储存在液氮中相同。操作步骤一、从培养细胞中提取总 RNA1. 收集细胞a. 悬浮细胞的收集（收集细胞数量请不要超过 1×107）：估计细胞数量，300×g 离心 5 min，将细胞收集到离心管中，仔细吸除所有培养基上清。b. 单层贴壁细胞的收集（收集细胞数量请不要超过 1×107）：可直接在培养容器中裂解（容器直径不超过 10 cm），或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。（在摇瓶中培养的单层贴壁细胞通常采用胰蛋白酶处理的方法。）Ø 直接裂解法：确定细胞数量，彻底吸除细胞培养基上清，立即进行第 2 步裂解步骤。Ø 胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用 PBS 洗涤细胞，吸除 PBS，向细胞中加入含有0.10-0.25%胰蛋白酶的 PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-Free 的离心管中，300×g 离心 5 min，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清。注意：收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，影响 RNA 与吸附柱的结合， 造成RNA 的产量降低;请勿使用过多的样本量，避免管柱杜塞而造成 RNA 的产量降低。3. 将所有溶液转移至过滤柱 CS1 上(过滤柱 CS1 放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2min，收集滤液。 4. 向滤液加入等体积 70%乙醇至裂解液中，混匀（此时可能会出现沉淀），转至后面“RNA 提取步骤”。 二、从动物组织中提取总 RNA1. 匀浆处理：每 10-20 mg 组织加 300 μl 裂解液RL（使用前请先检查是否已加入 β-巯基乙醇），用研磨杵将组织彻底研磨（如组织较难彻底研磨，可选用电动或玻璃匀浆器）；随后向匀浆液 中加入 590 μl RNase-Free ddH2O 和10 μl Proteinase K（20mg/ml），混匀后 56℃处理 10-20 min。注意：组织量一定不要超过 20 mg，否则将导致RNA 得率和质量下降。2. 将裂解混合液转移至过滤柱 CS1(过滤柱 CS1 放入收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2min，收集滤液。 3. 向滤液加入 0.5 倍上清体积的无水乙醇，均匀（此时可能会出现沉淀），转至后面“RNA 提取步骤”。 三、从细菌中提取总RNA1.4℃12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min 收集菌体（收集菌体的最大量不超过 1×109），仔细去除所有培养基上清，以后的所有离心步骤均在室温（20-25℃）进行。注意：如果培养基上清去除不完全，将对第二步中的细胞壁消化过程产生抑制。2. 用含有溶菌酶的 100μl TE 缓冲液（客户自己配制，配制方法见下表）彻底重悬菌体，孵育时间见下表。 TE 缓冲液中的溶菌酶终浓度孵育时间（室温）G-细菌400 μg/ ml3-5 minG+细菌3 mg/ ml5-10 min3. 加入 350μl 裂解液 RL（使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），涡旋振荡混匀。 4. 将裂解混合液转移至过滤柱 CS1 上(过滤柱CS1 放入收集管)，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2min，收集滤液。 5. 向滤液中加入 250μl 无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀），转至后面“RNA 提取步骤”。 四、从植物组织中提取总 RNA本试剂盒不适用于富含淀粉、酚类和次级代谢物的植物组织（例如一些木本植物，胚乳或丝状真菌的菌 丝体），因为 2-ME/裂解液在加入至样本粉末后，会变固态或非常粘稠,此类植物组织请使用“多糖多酚植物总RNA 提取kit”（货号 TR22）。 1. 匀浆处理50-100 mg 植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末，加入 450 μl RL（使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），涡旋剧烈震荡混匀，并于 56℃孵育 3 分钟。 注意 1：在 56℃孵育 1-3 min 将有助于植物组织裂解，但是对于某些富含淀粉的样品，请不要加热处理， 防止因淀粉引起的样品膨胀现象。注意 2：由于植物多样性非常丰富，而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的 RNA 含量都不相同， 请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。2. 将所有溶液转移至过滤柱 CS1 上(过滤柱 CS1 放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2-5 min，小心吸取收集管中的上清至RNase-Free 的离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。注意：由于裂解液较粘稠，所以将溶液转移至过滤柱时，可以剪去部分吸头末端。3. 缓慢加入 0.5 倍上清体积的无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀），转至“RNA 提取步骤”。 u RNA 提取步骤 此为续接样本制备“一、二、三、四、五”后的RNA 提取操作步骤。1. 将前一步所得“裂解液/乙醇混合液”（含沉淀），移取至吸附柱 CR1 中（吸附柱 CR1 放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g )离心 30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 CR1 放回收集管中。注意：将溶液和沉淀转移至吸附柱CR1 时，如果体积大于吸附柱容量，可以分次完成。2. 向吸附柱CR1 中加入 500ul 溶液RW，12,000 rpm (~13,400×g )离心离心 1 min，丢弃滤液，将吸附柱CR1 放回收集管中。3. DNase Ⅰ降解。每一纯化反应，请将 80 ul DNase 消化液与 2ul DNaseⅠ预先混合在新的离心管(轻弹或翻转离心管以混合均匀，请勿震荡)，将 82 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室温（25~28℃）孵育15 分钟。注意：如同时操作多组样本，请使用前现配新鲜的 DNaseⅠ工作液,请勿预先配制保存 DNaseⅠ工作液。4.向吸附柱CR1 中加入 500μl 溶液RW，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR1 放回收集管中。5. 向吸附柱CR1 中加入 600μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g) 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR1 放回收集管中。6. 重复操作步骤 5。7.12,000 rpm(~13,400×g)离心 3 min，将吸附柱CR1 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱 CR1 在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的 RT 等实验。8. 将吸附柱CR1 转入一个新的 RNase-Free 离心管中，加入 30-100 μl 无酶双蒸水至吸附柱的膜中心，室温静置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min，得到 RNA 溶液。注意：洗脱缓冲液体积不应少于 30 μl，体积过小影响回收效率；RNA 溶液请于-70℃保存。附录Ⅰ：从酵母菌中提取总 RNA一、需要自备的试剂：a.溶壁酶（Lyticase）：目录号 GF0210-01 b.山梨醇 buffer：用0.1M磷酸钠缓冲液(pH7.4)配制1.2 M山梨醇;0.1M磷酸钠缓冲液(pH7.4)的配制：77.4 ml 0.1 mol/L Na2HPO4+ 22.6ml 0.1mol/L NaH2PO4二、操作步骤1. 取酵母细胞（最多不超过5×107cells），12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。2. 酵母细胞壁的破除：酶法：向菌体中加入1ml山梨醇buffer，加入大约50U Lyticase（需自备，我司目录号：GF0210-01）充分混匀，30℃孵育30min，300×g离心5 min，弃上清，收集沉淀。注意：以上为5×107酵母细胞的Lyticase用量，根据酵母的菌株和酵母细胞数量的不同，所用Lyticase 的浓度和孵育时间应该进行适当调整。3. 加入 350 μl 裂解液 RL（在使用前请加入 β-巯基乙醇），涡旋振荡混匀，将裂解混合液转移至过滤柱 CS1上(过滤柱 CS1 放入收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2min，收集滤液。4. 向滤液中加入 350μl 70%乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀），转至上面“RNA 提取步骤”。 附录Ⅱ：RNA Clean -Up 或基因组 DNA 去除。本试剂盒可用于将以其他方法提取的 RAN 进行clean up 或去除基因组DNA 污染。1. 将RNA 以无酶水调整体积至 100ul，加入 350ul 的裂解液 RL（使用前请加入β 巯基乙醇），混合均匀。2. 加入 250ul 的无水乙醇至裂解液中，混匀，转至上面“RNA 提取步骤”。
多糖多酚植物基因组DNA提取试剂盒
基本售价：544.00元
储存条件 该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存18个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保 存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预 热10 min，以溶解沉淀。 产品简介及特点 本试剂盒采用特异性结合 DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲系统，能从多种植物组织中分离纯化高质量 基因组 DNA，独特的沉淀溶液可以沉淀去除多糖多酚植物样本中的蛋白质、多糖以及酚类等杂质。提取的基 因组 DNA 纯度高，质量稳定可靠。 使用本试剂盒纯化的基因组 DNA 适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交、芯 片检测、高通量测序等实验。 简便快捷：1 h内即可获得高纯度的基因组DNA。 适用广泛：适用于多种植物组织，尤其是多糖多酚植物。 安全无毒：无需酚/氯仿等有毒有机试剂。 超纯高效：高效获得高纯度的DNA，可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。 注意事项 1.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。 2.若溶液 GS1 或溶液 PBC 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。 事前准备： 1.溶液 GS2 制备：加入 2ml 无菌水到 0.46g 溶液 GS2 浓缩液粉末中,旋涡 1 分钟，50℃孵育至完全溶解，得 溶液 GS2。制备好的溶液 GS2 长期保存需要储存在 4℃。 2.向溶液 PBC 中加入 30ml 无水乙醇，混匀，室温保存。 3.向漂洗液 PW 中加入 64ml 无水乙醇，混匀，室温保存。 4.在研磨组织之前解冻溶液 GS2;将水浴或金属浴预热至 65℃。 操作步骤使用前请先在溶液PBC和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。 1.取植物新鲜组织约 100 mg 或干重组织约 30 mg，加入液氮充分碾磨。 注意：使用超过推荐量的样品可能堵塞吸附柱，降低回收率和质量。 2.立即将研磨好的粉末迅速转移至 1.5 ml 微量离心管中，并添加 360μ 溶液 GS1、40μl 制备好的溶液 GS2 和 25μl RNaseA 溶液，迅速涡旋混匀。 注意：不要预先混合这些溶液。 注意：为了获得最佳产量，彻底研磨组织，不充分研磨的组织中的 DNA 可能无法被试剂接触到;为了得到 完整的 DNA，新鲜组织应在液氮中迅速冷冻并存储在-80℃中。 3.将离心管放在 65℃水浴 20 min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。 4.加入 130 μl 溶液 PGP，涡旋振荡 1 min，混匀后将离心管置于冰上静置 5min，然后 12,000 rpm (~13,400×g ) 离心 5 min。 5.转移上清至过滤柱 CS1 中（过滤柱 CS1 放在收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心 1 min ，转移滤 液至新的离心管中。 6.向滤液中加入 1.5 倍体积的“溶液 PBC（已添加无水乙醇）”，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，但不 影响后续 DNA 的纯化。 例如：对于 500ul 滤液，加入 750ul 溶液 PBC（已添加无水乙醇） 7.将上一步所得溶液和絮状沉淀“分次”转移到吸附柱 CG1 中（吸附柱 CG1 放在收集管中），12,000 rpm (~13,400×g ) 离心 1 min，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放入收集管中。 8.向吸附柱 CG1 中加入 700μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400× g)离心 1 min，丢弃废液，将吸附柱 CG1 放入收集管中。 9.重复操作步骤 8。 10.将吸附柱 CG1 放回收集管中，12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min，弃收集管，然后将吸附柱 CG1 转移 到新的离心管中，室温晾干 5-10 min。 注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净，但也不要干燥太长时间，以免 难以洗脱 DNA。 11.在吸附柱 CG1 中加入 50-200μl 洗脱缓冲液 TB，室温放置 3-5 min，12,000rpm(~13,400×g)离心 2 min， 将溶液收集到离心管中。 注意：洗脱缓冲液体积不应少于 50μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影 响。若用 ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；且 DNA 产物 应保存在-20℃，以防 DNA 降解。 为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中， 室温放置 2 min，12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min。
植物基因组DNA提取试剂盒
基本售价：544.00元
储存条件 该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存18个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。 产品简介及特点 本试剂盒采用特异性结合 DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲系统，能从多种植物组织中分离纯化高质量基因组 DNA，独特的沉淀溶液可以沉淀去除多糖多酚植物样本中的蛋白质、多糖以及酚类等杂质。提取的基因组 DNA 纯度高，质量稳定可靠。 使用本试剂盒纯化的基因组 DNA 适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交、芯片检测、高通量测序等实验。 简便快捷：1 h内即可获得高纯度的基因组DNA。 适用广泛：适用于多种植物组织，包括多糖多酚植物。 安全无毒：无需酚/氯仿等有毒有机试剂。 超纯高效：高效获得高纯度的DNA，可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。 注意事项 1.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。 2.若溶液 GS1 或溶液 BC 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。 事前准备： 1.溶液 GS2 制备：加入 2ml 无菌水到 0.46g 溶液 GS2 浓缩液粉末中,旋涡 1 分钟，50℃孵育至完全溶解，得溶液 GS2。 制备好的溶液 GS2 长期保存需要储存在 4℃。 2.向溶液 BC 中加入 30ml 无水乙醇，混匀，室温保存。 3.向漂洗液 PW 中加入 64ml 无水乙醇，混匀，室温保存。 4.在研磨组织之前解冻溶液 GS2;将水浴或金属浴预热至 65℃。 操作步骤 使用前请先在溶液BC和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。 1.取植物新鲜组织约 100 mg 或干重组织约 30 mg，加入液氮充分碾磨。 注意：使用超过推荐量的样品可能堵塞吸附柱，降低回收率和质量。 2.立即将研磨好的粉末迅速转移至 1.5 ml 微量离心管中，并添加 360μ 溶液 GS1、40μl 制备好的溶液 GS2和 25μl RNaseA 溶液，迅速涡旋混匀。 注意：不要预先混合这些溶液。 注意：为了获得最佳产量，彻底研磨组织，不充分研磨的组织中的 DNA 可能无法被试剂接触到;为了得到完整的 DNA，新鲜组织应在液氮中迅速冷冻并存储在-80℃中。 3.将离心管放在 65℃水浴 20 min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。 4.加入 130 μl 溶液 GP，涡旋振荡 1 min，混匀后将离心管置于冰上静置 5min，然后 12,000 rpm (~13,400×g )离心 5 min。 5.转移上清至过滤柱 CS1 中（过滤柱 CS1 放在收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心 1 min ，转移滤液至新的离心管中。 6.向滤液中加入 1.5 倍体积的“溶液 BC（已添加无水乙醇）”，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，但不影响后续 DNA 的纯化。 例如：对于 500ul 滤液，加入 750ul 溶液 BC（已添加无水乙醇） 7.将上一步所得溶液和絮状沉淀“分次”转移到吸附柱 CG1 中（吸附柱 CG1 放在收集管中），12,000 rpm(~13,400×g ) 离心 1 min，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放入收集管中。 8.向吸附柱 CG1 中加入 700μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心 1 min，丢弃废液，将吸附柱 CG1 放入收集管中。 9.重复操作步骤 8。 10.将吸附柱 CG1 放回收集管中，12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min，弃收集管，然后将吸附柱 CG1 转移到新的离心管中，室温晾干 5-10 min。 注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净，但也不要干燥太长时间，以免难以洗脱 DNA。 11.在吸附柱 CG1 中加入 50-200μl 洗脱缓冲液 TB，室温放置 3-5 min，12,000rpm(~13,400×g)离心 2 min，将溶液收集到离心管中。 注意：洗脱缓冲液体积不应少于 50μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用 ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；且 DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。 为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中，室温放置 2 min，12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min。
酵母基因组DNA提取试剂盒
基本售价：384.00元
选配试剂RNase A (100 mg/ml)目录号：GF020-01储存条件该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存18个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱，和独特的缓冲液系统，能高效、专一吸附 DNA，可有效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,用来提取酵母细胞中的基因组 DNA。不需要苯酚、氯仿等有机溶剂，安全方便；提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。菌体浓度检测可采用分光光度计或平板培养法检测菌体量，一般对于酿酒酵母，OD600值为1.0时，相当于1-2×107cells / ml。注意事项1.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。2.若溶液 GA 或溶液 BG 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。3.所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。需要自备的试剂1.溶壁酶 Lyticase（目录号：GF0210-01）2.山梨醇 buffer：用0.1M磷酸钠缓冲液(pH7.4)配制1.2 M山梨醇;0.1M磷酸钠缓冲液(pH7.4)的配制：77.4 ml 0.1 mol/L Na2HPO4+ 22.6ml 0.1mol/L NaH2PO4操作步骤 使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。 1.取酵母细胞（最多不超过5×107 cells），12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。 2.酵母细胞壁的破除： 酶法：向菌体中加入600 μl山梨醇buffer，加入大约200 U Lyticase（客户自备，目录号：GF1203-01），充分混匀。30℃处理30 min。4000 rpm(~1500×g)离心10 min，弃上清，收集沉淀。 注意：以上为5×107酵母细胞的Lyticase用量，根据酵母的菌株和酵母细胞数量的不同，所用Lyticase的浓度和孵育时间应该进行适当调整。 3. 向沉淀中加入200 μl溶液GA重悬沉淀，充分混匀。 如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：GF020-01），振荡15 sec，室温放置5 min。 4.加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。 5.加入200 μl溶液BG，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取的DNA不纯。 6.加入 200ul 无水乙醇，充分振荡混匀 15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 7.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 CG1 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放回收集管中。 8.向吸附柱 CG1 中加入 300μl 溶液 BG，12,000rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放入收集管中。 注意：这一步骤对于清除内切酶是必不可少的，以防止污染。 9.向吸附柱 CG1中加入 700μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放入收集管中。 10.重复操作步骤 9。 11.将吸附柱 CG1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CG1 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。 12.将吸附柱 CG1 转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200μl 洗脱缓冲液 TB，室温放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min，将溶液收集到离心管中。 注意：洗脱液体积不应少于 50μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用 ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室温放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 min。
细菌基因组DNA提取试剂盒
基本售价：336.00元
选配试剂RNase A (100 mg/ml)目录号：GF0201-01；溶菌酶溶液（50 mg/ml）目录号：GF0203-01储存条件该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存18个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。产品简介及特点本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱，和独特的缓冲液系统，能高效、专一吸附 DNA，可有效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,用来提取细菌的基因组 DNA。不需要苯酚、氯仿等有机溶剂，安全方便；提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。提取得率材料 提取量 DNA 得率细菌培养液 106 -108 cells 5-20ug注意事项1.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。2.若溶液 GA 或溶液 BG 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。3.所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。1.取细菌培养液1-5 ml，10,000 rpm(~11,500×g)离心1 min，尽量吸净上清。2.向菌体沉淀中加入200 μl溶液GA，振荡至菌体彻底悬浮。注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过第2步骤，加入溶菌酶溶液进行破壁处理，具体方法为：加入110 μl溶菌酶缓冲液（20 mM Tris, pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2%Triton），和70 μl溶菌酶溶液（50 mg/ml，客户自备，目录号：RT401），37 ℃处理30min以上。 如果需要去除RNA，可加入4 μlRNase A（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：GF1202-01），振荡15 sec，室温放置5 min。 3.向管中加入20μl Proteinase K溶液，混匀。 4.加入200 μl溶液BG，振荡15 sec，70 ℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。 5.加入 200ul 无水乙醇，充分振荡混匀 15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 6.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 CG1 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放回收集管中。 7.向吸附柱 CG1 中加入 300μl 溶液 BG，12,000rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放入收集管中。 注意：这一步骤对于清除内切酶是必不可少的，以防止污染。 8.向吸附柱 CG1中加入 700μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放入收集管中。 9.重复操作步骤 8。 10.将吸附柱 CG1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CG1 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。 11.将吸附柱 CG1 转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200μl 洗脱缓冲液 TB，室温放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min，将溶液收集到离心管中。 注意：洗脱液体积不应少于 50μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。 若用 ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室温放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 min。
血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒
基本售价：1200.00元
血液/细胞/组织基因组 DNA 纯化试剂盒 产品组成 GF304-02 GF304-03 (50 preps) (200 preps) 溶液 GA (Buffer GA) 15 ml 60 ml 溶液 BG (Buffer BG) 30ml 120ml 蛋白酶 K (20mg/ml) 1.1ml 4*1.1ml 漂洗液 PW (Buffer PW) 16ml（使用前请先加入 64ml 无水乙醇） 64ml（使用前请先加入 256ml 无水乙醇） 洗脱缓冲液 TB (Buffer TB) 15 ml 60 ml 吸附柱 CG1 (Spin Columns CG1) 50 个 200 个 收集管(2 ml) (Collection Tubes 2ml) 50 个 200 个 选配试剂红细胞裂解液（Red Cell Lysis Buffer 货号：GF1201-01）;RNase A (100mg/ml) 货号：GF0201-01) 储存条件该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存18个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保 存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预 热10 min，以溶解沉淀。 产品简介及特点本试剂盒采用可以特异性结合DNA 的离心吸附柱，和独特的缓冲液系统，能高效、专一吸附DNA，可有 效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,用来提取多种细胞中的基因组 DNA。不需要苯酚、氯仿等有机溶剂，安全方便；提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，质量稳定可靠。根据不同的样本量和样本类型，可以提取的DNA 产量范围为 1-40ug。 使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。 注意事项 1. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量也下降。2. 若溶液 GA 或溶液BG 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。 3. 所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。操作步骤 使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。1.处理材料a. 如提取材料为血液，可直接使用 200μl 新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足 200 μl 可加溶液GA 补足；注意：如需处理更大体积血液，如 300μl-1 ml，应按以下步骤操作：在样品中加入 3 倍体积红细胞裂解液 （例如，300μl 血液加入 900μl 红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置 5 min，期间再颠倒混匀几次。10000 rpm(~11,500×g)离心 1 min（若离心机最高转速不允许，可 3000 rpm(~3,400×g)离心5 min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加 200 μl 溶液 GA，振荡至彻底混匀。 红细胞裂解液本公司另外有售（货号：GF1201-01），可根据需要来决定购买。 b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量 5- 20μl，可加溶液 GA 补足 200 μl 后进行下面的裂解步骤。c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后 10,000 rpm(~11,200×g)离心 1 min，倒尽上清，加 200 μl 溶液GA，振荡至彻底悬浮。d. 动物组织（脾组织用量应少 10 mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后 10,000rpm(~11,200×g)离心 1 min，倒尽上清，加 200 μl 缓冲液 GA，振荡至彻底悬浮。注意：如果需要去除RNA，可加入 4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：GF0201-01）， 振荡 15 sec，室温放置 5 min。2. 加入 20μl Proteinase K 溶液，混匀。 a.提取血液基因组时，加入Proteinase K，混匀，即可继续进行下一步。 b.提取细胞基因组时，加入Proteinase K，混匀，即可继续进行下一步。 c.提取组织基因组时，加入 Proteinase K 混匀后，在 56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。注意：不同组织裂解时间不同，通常需 1-3 h 即可完成（鼠尾需要消化过夜），每小时颠倒混合样品 2-3次，用水浴振荡器也可。3. 加入 200ul 溶液 BG，充分颠倒混匀，70℃放置 10 min,溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入溶液 BG 时可能会产生白色沉淀，一般 70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取 DNA 量少和提取出的DNA 不纯。当血液体积≤200μl 且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。4. 加入 200ul 无水乙醇，充分振荡混匀 15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CG1 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱CG1 放回收集管中。 6. 向吸附柱CG1 中加入 300μl 溶液BG，12,000rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放入收集管中。注意：这一步骤对于清除内切酶是必不可少的，以防止污染。7. 向吸附柱CG1 中加入700μl 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱CG1 放入收集管中。 8. 重复操作步骤 7。9. 将吸附柱CG1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CG1 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、 PCR 等）实验。10. 将吸附柱 CG1 转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200μl 洗脱缓冲液TB，室温放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min，将溶液收集到离心管中。注意：洗脱液体积不应少于 50μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室温放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 min。
血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒
基本售价：273.00元
血液/细胞/组织基因组 DNA 纯化试剂盒 产品组成 GF304-02 GF304-03 (50 preps) (200 preps) 溶液 GA (Buffer GA) 15 ml 60 ml 溶液 BG (Buffer BG) 30ml 120ml 蛋白酶 K (20mg/ml) 1.1ml 4*1.1ml 漂洗液 PW (Buffer PW) 16ml（使用前请先加入 64ml 无水乙醇） 64ml（使用前请先加入 256ml 无水乙醇） 洗脱缓冲液 TB (Buffer TB) 15 ml 60 ml 吸附柱 CG1 (Spin Columns CG1) 50 个 200 个 收集管(2 ml) (Collection Tubes 2ml) 50 个 200 个 选配试剂红细胞裂解液（Red Cell Lysis Buffer 货号：GF1201-01）;RNase A (100mg/ml) 货号：GF0201-01) 储存条件该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存18个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保 存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预 热10 min，以溶解沉淀。 产品简介及特点本试剂盒采用可以特异性结合DNA 的离心吸附柱，和独特的缓冲液系统，能高效、专一吸附DNA，可有 效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,用来提取多种细胞中的基因组 DNA。不需要苯酚、氯仿等有机溶剂，安全方便；提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，质量稳定可靠。根据不同的样本量和样本类型，可以提取的DNA 产量范围为 1-40ug。 使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。 注意事项 1. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量也下降。2. 若溶液 GA 或溶液BG 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。 3. 所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。操作步骤 使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。1.处理材料a. 如提取材料为血液，可直接使用 200μl 新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足 200 μl 可加溶液GA 补足；注意：如需处理更大体积血液，如 300μl-1 ml，应按以下步骤操作：在样品中加入 3 倍体积红细胞裂解液 （例如，300μl 血液加入 900μl 红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置 5 min，期间再颠倒混匀几次。10000 rpm(~11,500×g)离心 1 min（若离心机最高转速不允许，可 3000 rpm(~3,400×g)离心5 min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加 200 μl 溶液 GA，振荡至彻底混匀。 红细胞裂解液本公司另外有售（货号：GF1201-01），可根据需要来决定购买。 b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量 5- 20μl，可加溶液 GA 补足 200 μl 后进行下面的裂解步骤。c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后 10,000 rpm(~11,200×g)离心 1 min，倒尽上清，加 200 μl 溶液GA，振荡至彻底悬浮。d. 动物组织（脾组织用量应少 10 mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后 10,000rpm(~11,200×g)离心 1 min，倒尽上清，加 200 μl 缓冲液 GA，振荡至彻底悬浮。注意：如果需要去除RNA，可加入 4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：GF0201-01）， 振荡 15 sec，室温放置 5 min。2. 加入 20μl Proteinase K 溶液，混匀。 a.提取血液基因组时，加入Proteinase K，混匀，即可继续进行下一步。 b.提取细胞基因组时，加入Proteinase K，混匀，即可继续进行下一步。 c.提取组织基因组时，加入 Proteinase K 混匀后，在 56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。注意：不同组织裂解时间不同，通常需 1-3 h 即可完成（鼠尾需要消化过夜），每小时颠倒混合样品 2-3次，用水浴振荡器也可。3. 加入 200ul 溶液 BG，充分颠倒混匀，70℃放置 10 min,溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入溶液 BG 时可能会产生白色沉淀，一般 70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取 DNA 量少和提取出的DNA 不纯。当血液体积≤200μl 且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。4. 加入 200ul 无水乙醇，充分振荡混匀 15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CG1 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱CG1 放回收集管中。 6. 向吸附柱CG1 中加入 300μl 溶液BG，12,000rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放入收集管中。注意：这一步骤对于清除内切酶是必不可少的，以防止污染。7. 向吸附柱CG1 中加入700μl 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱CG1 放入收集管中。 8. 重复操作步骤 7。9. 将吸附柱CG1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CG1 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、 PCR 等）实验。10. 将吸附柱 CG1 转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200μl 洗脱缓冲液TB，室温放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min，将溶液收集到离心管中。注意：洗脱液体积不应少于 50μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室温放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 min。
通用型DNA纯化回收试剂盒
基本售价：944.00元
储存条件该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存18个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。产品简介及特性本试剂盒采用独特的缓冲液体系和离心吸附柱，既能从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收100 bp-20 kb大小的DNA片段，又能用于直接纯化PCR产物，满足多种实验需要。整个纯化过程可在15分钟完成、不需进行苯酚萃取及酒精沉淀、纯化的DNA无盐类或大分子的污染。如果回收前DNA量为1-5ug，建议选用超薄DNA产物纯化试剂盒GF203或超薄琼脂糖凝胶回收试剂盒DF208，推荐洗脱液体积20-50ul。a.使用相同的溶液，可进行三种不同的应用（PCR 产物纯化、DNA 产物纯化、胶体回收）。b.每一离心管柱可处理达 150ul 的 DNA 溶液或 PCR 反应产物，DNA 回收率可达 80%~95%。c.可用于以 TAE 或 TBE 缓冲液配制的琼脂糖凝胶的 DNA 回收，DNA 回收率可达 60~90%。注意事项1.电泳时应使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。2.如下一步实验要求较高，则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。3.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对 DNA 造成损伤。4.洗脱缓冲液加量应根据回收前DNA量来决定：如回收前DNA只有1-5μg左右（推荐选用GF203或GF208超薄型试剂盒），加20-50μl洗脱液；如回收前有5-15μg左右DNA，加30-100μl洗脱缓冲液；如回收前有15-30μg左右DNA，加50-300μl洗脱缓冲液。5.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。6.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。一、从 PCR 反应液或酶切反应液中回收 DNA 1.完成 PCR 扩增或其他酶切反应操作后，移取反应混合液（含有预纯化的 DNA）至干净的离心管。 2.加入 3 倍体积的溶液 PC 至反应混合液中（如 50ul 反应混合液加入 150ul 的结合液）,震荡混合均匀。 3.将吸附柱放入收集管中，移取上一步混合液至吸附柱，室温放置 2 min，以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟，丢弃收集管中的悬液，将吸附柱 CB1 放回收集管中。 注意：若样本体积超过 700ul，可分次加入并重复此步骤。 4.加入 700ul 的漂洗液至吸附柱中，静置 1 分钟以平衡管柱膜，于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟，丢弃悬液，将吸附柱 CB1 放回收集管中。 5.重复操作步骤 4。 6.将吸附柱 CB1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟，将吸附柱开盖置于室温放置数分钟，以去除、晾干残余的漂洗液。 注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR 等实验 7.将吸附柱 CB1 置于一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液 TB，室温放置 2 min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意：洗脱体积不应小于 30 μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响，若后续做测序，需使用 ddH2O 做洗脱液，并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；且 DNA 产物应保存在-20°C，以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min，将 DNA 溶液收集到离心管。 二、从琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段 1.完成电泳后，将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量（如果凝胶重为 0.1 g，其体积可视为 100 μl）。 2.向胶块中加入 2 倍体积（如果琼脂糖凝胶浓度＞2%，则加入 3 倍体积）的溶液 PC，60℃水浴孵育 5-15 min或更久，其间不断温和地上下翻转离心管，直至胶块充分溶解（若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块）。 注意：胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。 3.将吸附柱放入收集管中，移取上一步溶胶液至吸附柱，以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟，丢弃收集管中的滤液，将吸附柱 CB1 放回收集管中。 注意：若样本体积超过 700ul，可分次加入并重复此步骤。 4.可选步骤：向吸附柱 CB1 加入 400ul 的溶液 PC，以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟，丢弃收集管中的滤液，将吸附柱 CB1 放回收集管中（此步骤可去除残余的琼脂糖凝胶，以避免纯化的 DNA 进行酶切反应时出现抑制现象）。 5.向吸附柱加入 700ul 的漂洗液，静置 1 分钟以平衡管柱膜，于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟，丢弃滤液，将吸附柱 CB1 放回收集管中。 6.重复操作步骤 5。 7.将吸附柱 CB1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟，将吸附柱开盖置于室温放置数分钟，以去除、晾干残余的漂洗液。 注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR 等实验。 8.将吸附柱 CB1 置于一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱液 TB，静置 2 分钟，室温放置 2 min，12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意：洗脱体积不应小于 30 μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响，若后续做测序，需使用 ddH2O 做洗脱液，并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；且 DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min，将 DNA 溶液收集到离心管。
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