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NCM/新赛美 快速重组无缝克隆试剂盒
基本售价：249.00元
产品介绍 EasyFusion Assembly Master Mix 是一种快速、简单且高效的定向同源重组克隆试剂盒，可将目的片段一个或多个 （PCR 产物）定向克隆到任意载体的任意位置。该技术不依赖于 T4 连接酶、不受载体和目的片段的酶切位点限制， 仅需 15-30 分钟实现高效无缝连接。 操作步骤 1.线性化载体准备 可以通过以下两种方法获得线性化载体，最终载体的浓度需>10 ng/μl。(高浓度的载体有利于提高效率)。 （1）选择合适的酶切位点线性化载体。（单酶切或双酶切均可， 5´端突出、3´端突出或平末端均适用） （2）以载体为模板，设计引物，通过 PCR 的方式扩增出需要的线性化载体 2.扩增插入片段引物设计 通常通过 PCR 获得目的片段，引物设计要保证目的片段两端有至少 15bp-20bp 序列与线性化载体的两端一致的 同源序列。PCR 每条引物长度至少在 35-40bp 之间，包括 5´ 端和 3´端与线性载体同源的 15bp-20bp（不包括酶 切位点）以及目的片段特异性序列 20-25bp。 （1）单个片段的引物设计： 引物包含目的基因特异性序列和重叠序列 插入片段正向扩增引物设计方式为： 5´-上游载体末端 15-20bp 同源序列+目的基因特异性正向扩增引物序列(20-25bp)-3´ 插入片段反向扩增引物设计方式为： 5´-下游载体末端 15-20bp 同源序列+目的基因特异性正向扩增引物序列(20-25bp)-3´ 设计引物时，可以参考以下实例（以 pUC19 线性化载体为例）： 3.PCR 扩增插入片段 推荐使用高保真聚合酶进行 PCR 扩增插入片段，以减少扩增突变的产生，选择聚合酶时无需考虑末端有无 A 加尾 发生（重组过程中将会被去除，在最终载体中不会出现）。PCR 扩增结束后，对目的 PCR 产物进行纯化：若是扩增模 板与克隆载体抗性不同，且 PCR 产物条带电泳单一，产物可以无需纯化直接用于重组反应，或者对 PCR 产物进行脱盐 等简单纯化；否则，需要进行琼脂糖凝胶电泳回收特异性的目的 PCR 片段。 4.重组反应进行 取出 EasyFusion Assembly Master mix, 置于冰浴中，配制下图应体系（如果不慎将液体粘在管壁，可通过短暂离心沉降） 注意：10 ul 反应体系中，载体和各插入片段建议量在 20-50ng 之间，载体与各插入片段的最佳摩尔比为 1:2-1:3 轻轻混匀反应体系，50℃反应 15-30 分钟（对于多片段重组或大片段重组，建议反应时间 30 分钟，可延长反应时 间至 1 小时）；待反应结束后，将离心管置于冰上冷却数秒，之后将重组产物保存于-20℃或用于转化。 5. 反应产物转化、涂板及克隆鉴定 建议所使用的感受态细胞效率要达到> 5X 107 cfu/ug。转化步骤按照不同菌种的要求进行或者按标准转化操作 进行即可。菌落长出之后，建议采用菌落 PCR 进行阳性克隆鉴定，或者对样品进行测序确保正确。 保存条件及组成成分 -20℃保存及冰袋运输 组成成分：2X EasyFusion Assembly Master Mix , 125ul; Linearized pUC19 Vector (10ng/ul),5ul;Control Insert（0.5kb, 20ng/ul),5ul 注意事项 1. 线性化载体或目的片段的纯化的品质及浓度等较差会显著降低克隆阳性率及克隆数。 2. 重组质粒大小的增加（>12kb），克隆效率会显著降低，选择稳定性更好的感受态及转化效率更高效的感受态细胞。 3. 菌落较少时，建议适当增加重组反应产物的体积量，或者提高转化产物量等。 4. 随着重组片段数目的增加，克隆效率降低，建议增加引物重叠序列长度或适当延长反应时间。
NCM/新赛美 细胞/组织总RNA快速提取试剂盒
基本售价：499.00元
产品介绍 本试剂盒可以快速从细胞、细菌和动物组织中提取总RNA。本产品中裂解液(RLT Lysis Bufer)可以快速裂解细胞和灭活RNA酶，通过DNA清除/RNA吸附通用柱吸附技术，去除基因组DNA残留，同时在乙醇辅助结合条件下，高效地结合在吸附柱的硅胶膜上，再经过多次的洗涤离心后，去除细胞代谢物和蛋白质等杂质，获得纯净的总RNA。纯化的RNA可用于RT-PCR，NorthernBlotPoly(A)+筛选等多种实验。 产品亮点 安全性高:无需使用苯酚，氯仿等试剂，无需乙醇沉淀 使用范围广:对细胞、细菌、动物组织提取均适用 操作简单快速:全程室温操作，10-20分钟可完成纯化步骤 提取纯度高:经多次柱吸附和洗涤，基因组DNA和蛋白质污染低 首次使用前，在漂洗液 RWB Wash Buffer 中加入标签指定量的无水乙醇（5 preps/50 preps分别加入 4.8 ml/48 ml 无水乙醇），充分混匀后使用，并做好标记。 *注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季低温环境时），可 37℃温浴复溶至溶液澄清，避免影响使用效果。 运输和保存方式 常温运输，室温避光保存，有效期 12 个月。2-4°C 可保存更长时间
NCM/新赛美 总RNA提取试剂
基本售价：399.00元
产品介绍 TRnaZol Reagent 适用于快速、直接从多种组织和细胞中提取总 RNA 的一种广谱型试剂。TRnaZol Reagent 内含优化的异硫氰酸胍、酸性酚等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶，最大 限度地裂解样品且同时保证 RNA 的完整性。加入 RNA Extraction Buffer 离心后，溶液会分成三层：上 层无色水相、中间层和下层红色有机相，其中 RNA 分布在上清无色水相中。本试剂操作快速方便，颜 色分明，提取的总 RNA 完整性好，纯度高，无蛋白和 DNA 的污染，可用于各种分子生物学实验，如 RT-PCR、Real-time PCR、Dot Blot、Northern 等。 产品特色 ✔ 安全性高：使用 RNA Extraction Buffer 替代氯仿 ✔ 使用范围广：对人、动物、植物和细菌组织提取均适用 ✔ 颜色分明：溶液呈粉红色，便于分离水相和有机相 ✔ 提取纯度高：DNA 和蛋白质污染最低，可用于多种下游实验 产品介绍 TRnaZol Reagent 适用于快速、直接从多种组织和细胞中提取总 RNA 的一种广谱型试剂。TRnaZol Reagent 内含优化的异硫氰酸胍、酸性酚等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶，最大 限度地裂解样品且同时保证 RNA 的完整性。加入 RNA Extraction Buffer 离心后，溶液会分成三层：上 层无色水相、中间层和下层红色有机相，其中 RNA 分布在上清无色水相中。本试剂操作快速方便，颜 色分明，提取的总 RNA 完整性好，纯度高，无蛋白和 DNA 的污染，可用于各种分子生物学实验，如 RT-PCR、Real-time PCR、Dot Blot、Northern 等。 产品特色 ✔ 安全性高：使用 RNA Extraction Buffer 替代氯仿 ✔ 使用范围广：对人、动物、植物和细菌组织提取均适用 ✔ 颜色分明：溶液呈粉红色，便于分离水相和有机相 ✔ 提取纯度高：DNA 和蛋白质污染最低，可用于多种下游实验 组成成分及保存条件
NCM/新赛美 蛋白印迹膜再生液/抗体剥离液-500ml
基本售价：399.00元
产品介绍 NCM Western Blot Stripping Buffer（蛋白印迹膜再生液/抗体剥离液）是新赛美生物生产的用于去除结合在印迹膜（PVDF膜或NC膜）上的一抗和二抗的洗涤液。该产品作用温和，不含有毒有味的巯基乙醇，在不影响目的蛋白的情况下，可使同一张印迹膜进行多次抗体检测。省去反复电泳和转膜等步骤，节省样品及时间，加快Western Blot检测实验。 产品特色 Ø 独有的配方，去除抗体效力强 Ø 对蛋白作用温和，不影响目的蛋白 Ø 不含有巯基乙醇，无毒无味，室温条件下使用保存 Ø 适用PVDF膜和NC膜，加速抗体检测 操作步骤 1. 将曝光结束的蛋白印迹膜充分浸入适当体积的NCM Western BlotStripping Buffer（蛋白印迹膜再生液/抗体剥离液）中，抗体剥离液要充分覆盖膜的表面，在脱色摇床上，室温中速震荡孵育10分钟，弃去剥离液。 2. （可选）重复步骤1。（对于信号正常或较弱的印迹膜也可以不必重复步骤1，如果是内参等表达量高的蛋白，可以重复步骤1三次，以保证彻底去除了抗体。） 3. 每用镊子取出印迹膜，加入洗涤缓冲液TBST或PBST，在脱色摇床上中速震荡洗涤3次，每次5分钟。 4. (可选)通过显色曝光等方法检测抗体是否去除，如检测到信号，需重复步骤1，确保抗体被除尽。 5. 对印迹膜重新进行封闭，进入下一轮Western Blot 实验。 保存条件 室温保存，运输，一年有效 注意事项 1. 建议先检查表达量低的蛋白，再用NCM Western Blot Stripping Buffer处理印迹膜后，检测表达量高的蛋白； 2. 本品适用于NC膜和PVDF膜，推荐使用PVDF膜，效果更佳； 3. 为了安全和健康，请穿实验服，戴手套操作
NCM/新赛美 蛋白印迹膜再生液/抗体剥离液-200ml
基本售价：199.00元
产品介绍 NCM Western Blot Stripping Buffer（蛋白印迹膜再生液/抗体剥离液）是新赛美生物生产的用于去除结合在印迹膜（PVDF膜或NC膜）上的一抗和二抗的洗涤液。该产品作用温和，不含有毒有味的巯基乙醇，在不影响目的蛋白的情况下，可使同一张印迹膜进行多次抗体检测。省去反复电泳和转膜等步骤，节省样品及时间，加快Western Blot检测实验。 产品特色 Ø 独有的配方，去除抗体效力强 Ø 对蛋白作用温和，不影响目的蛋白 Ø 不含有巯基乙醇，无毒无味，室温条件下使用保存 Ø 适用PVDF膜和NC膜，加速抗体检测 操作步骤 1. 将曝光结束的蛋白印迹膜充分浸入适当体积的NCM Western BlotStripping Buffer（蛋白印迹膜再生液/抗体剥离液）中，抗体剥离液要充分覆盖膜的表面，在脱色摇床上，室温中速震荡孵育10分钟，弃去剥离液。 2. （可选）重复步骤1。（对于信号正常或较弱的印迹膜也可以不必重复步骤1，如果是内参等表达量高的蛋白，可以重复步骤1三次，以保证彻底去除了抗体。） 3. 每用镊子取出印迹膜，加入洗涤缓冲液TBST或PBST，在脱色摇床上中速震荡洗涤3次，每次5分钟。 4. (可选)通过显色曝光等方法检测抗体是否去除，如检测到信号，需重复步骤1，确保抗体被除尽。 5. 对印迹膜重新进行封闭，进入下一轮Western Blot 实验。 保存条件 室温保存，运输，一年有效 注意事项 1. 建议先检查表达量低的蛋白，再用NCM Western Blot Stripping Buffer处理印迹膜后，检测表达量高的蛋白； 2. 本品适用于NC膜和PVDF膜，推荐使用PVDF膜，效果更佳； 3. 为了安全和健康，请穿实验服，戴手套操作
NCM/新赛美 磷酸酶抑制剂混合液
基本售价：249.00元
产品介绍 新赛美生物的磷酸酶抑制剂混合液（ProtLytic Phosphatase Inhibitor Cocktail）是经优化好的多种 磷酸酶抑制剂的混合物组成的，是一种广谱的抑制剂混合物，在抽提和纯化蛋白时能够 有效防止蛋白被内源性的磷酸酶降解。成分主要含有 sodium fluoride，sodium orthovanadate，Sodium Pyrophosphate，β-glycerophosphate，Imidazole 等多种抑制剂， 主要抑制酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、ATP 酶等，用于蛋白纯化，蛋白免疫印迹, 免疫共 沉淀，免疫荧光，免疫组织化学，激酶测定等研究。 操作步骤 将磷酸酶抑制剂混合液，根据实验体系的需求，按照 1:100 的比率将其加入到样品 溶液中（如组织抽提物或细胞裂解物）。 保存条件 4 ℃保存，冰袋运输，至少 1 年有效； 注意事项 1. 磷酸酶抑制剂会损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危 险 2. 不同样品中含有的磷酸酶量及种类不同，可根据具体实验调整加入磷酸酶抑制剂混合液 的量，如加入 2 倍，3 倍等量，才能有效抑制内源性磷酸酶的作用 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴防护手套操作
NCM/新赛美 蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合液
基本售价：399.00元
产品介绍 新赛美生物的蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合液（Protease and PhosphataseInhibitor Cocktail） 是经优化好的多种蛋白酶和磷酸酶抑制剂的混合物组成的，仅用一种溶液即可方便地完 成在抽提和纯化蛋白时，能够有效防止蛋白被内源性的蛋白酶和磷酸酶的降解。成分含 有 Aprotinin，Bestatin，Leupetin，Pepstatin，PMSF，NaF，Sodium Orthovanadate，Sodium Pyrophosphate 等多种蛋白酶和磷酸酶家族的抑制剂，主要抑制氨基肽酶、半胱氨酸和 丝氨酸蛋白酶、丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸蛋白酶和磷酸酶、蛋白酪氨酸磷酸酶、碱性磷 酸酶、酸性磷酸酶等，用于蛋白纯化，蛋白免疫印迹, 免疫共沉淀，免疫荧光，免疫组 织化学，激酶测定等研究。 操作步骤 在室温下溶解含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合液，混匀之后，根据实验体系的需求， 按照 1:100 的比率将抑制剂混合液加入到样品溶液中（如组织抽提物或细胞裂解物）。 保存条件 -20 ℃保存，冰袋运输，至少 1 年有效； 注意事项 1. 蛋白酶和磷酸酶抑制剂严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收 后有致命危险； 2. 不同样品中含有的蛋白酶和磷酸酶的量及种类不同，可根据具体实验调整加入抑制剂混 合液的量，如加入 2 倍，3 倍等量，才能有效抑制内源性蛋白酶和磷酸酶的作用 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴防护手套操作
NCM/新赛美 RIPA裂解液
基本售价：199.00元
产品介绍 RIPA 即 Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液。新赛美生物的 RIPA 裂解液裂解所得的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等。主要成分是：50mMTris(pH 7.6)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodiumdeoxycholate，0.1% SDS 等多种裂解剂和抑制剂，能有效地抑制蛋白 降解。 操作步骤 对于培养细胞样品： 1. 取适当量的NCM RIPA Buffer 裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 注意：NCM RIPA Buffer 不含蛋白酶等抑制剂，根据需要在使用前添加蛋白酶，磷酸酶等抑制剂。 2. a.对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有 干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使 裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后，细胞就会被裂解。 b. 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。 对于组织样品： 1. 把组织剪切成细小的碎片。 2. 融解 RIPA 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓 度为 1mM。 3. 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加 更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 5. 充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀 等操作。 6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使样品裂解 充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点 是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。 保存条件 4℃保存，室温运输，1 年有效； 注意事项： 1.RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因 组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清 用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明 胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如 NFκB、p53 等时，通 常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。 2．为获得最佳的实验效果，可适当分装使用，以尽量避免反复冻融。 3．PMSF 应现用现加,需自备 PMSF。 4．裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 5．蛋白酶抑制剂均有较高的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦 直接接触，请立即用流水冲洗，再向医疗保健结构咨询。
NCM/新赛美 Cell Counting Kit-8-5000T
基本售价：2499.00元
产品介绍 Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是MTT，XTT等的替代方法，一种基于WST-8（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。WST-8在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的Formazan。对于同样的细胞，颜色的深浅(生成的Formazan量)和细胞数目呈线性关系。可用于药物筛选、细胞增殖和毒性测定、肿瘤药敏等试验。 操作步骤 一. 制作标准曲线（测定细胞具体数量） 1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞； 2.按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做4-7个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔； 3.接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加入CCK-8试剂（按每100 μL培养基加10μL CCK-8）培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。（使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致） 二. 细胞活性检测 1.在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)，将培养板放在培养箱中预培养一段时间； 2.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡，它们会影响OD值的读数)； 3.将培养板置于培养箱内孵育1-4小时； 4.用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。 三.细胞增殖-毒性检测 1.在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)，将培养板放在培养箱中预培养24小时； 2.向培养板加入不同浓度的待测药物； 3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间； 4.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡)； 5.将培养板置于培养箱内孵育1-4小时； 6.用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次， 然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。 四.活力计算 细胞存活率*（%）=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100% 抑制率*（%）=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100% As:实验孔吸光度(含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液)； Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液，不含药物) ； Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液，不含细胞、药物) 。 保存条件 4℃避光保存，有效期12个月；-20℃避光保存，有效期24个月 实验应用 1. 细胞增殖测定：CCK-8是水溶性的，在培养基中稳定且无毒。 2. 细胞活性分析，包括细胞毒性：代谢活性以及染料的形成与细胞的活性和损伤成比例。 3. 细胞因子分析：测定细胞因子诱导的增殖，必要时，可在试验结束时回收和扩增细胞 注意事项 1.CCK-8的培养时间一般为1-4小时，但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察显色程度，根据细胞种类而定，需要摸索条件，CCK-8的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。 2.使用96孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问 题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS,水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 3.本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂 (例如一些抗氧化剂)会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 4.加入药物中如含有金属，对 CCK-8 显色有影响。终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%,15%,90% 的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话，将会100% 抑制。 5.培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。 6.本产品可以检测革兰氏阴性细菌，但不能检测革兰氏阳性细菌和酵母细胞。向100μL培养液中加入10μL CCK-8溶液，并培养1-4小时或过夜。 7.CCK-8试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深，OD值不断增加(注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的)。 8.要测定细胞的具体数量，建议同时做标准曲线。 9.建议采用多通道移液器，以减小平行孔间的差异。 10.以下方法可以终止CCK-8反应(96 孔板)：(a).在显色反应后，将培养板放置4°C冰箱内。(b).每孔加10μL 0.1M HCl溶液。(c).每孔加10μL 1% (w/v) 的SDS (十二烷基硫酸钠)溶液。注意：反应停止后，应在24小时内测定。 11. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。 12. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
CM/新赛美 Cell Counting Kit-8-500T
基本售价：299.00元
产品介绍 Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是MTT，XTT等的替代方法，一种基于WST-8（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。WST-8在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的Formazan。对于同样的细胞，颜色的深浅(生成的Formazan量)和细胞数目呈线性关系。可用于药物筛选、细胞增殖和毒性测定、肿瘤药敏等试验。 操作步骤 一. 制作标准曲线（测定细胞具体数量） 1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞； 2.按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做4-7个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔； 3.接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加入CCK-8试剂（按每100 μL培养基加10μL CCK-8）培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。（使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致） 二. 细胞活性检测 1.在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)，将培养板放在培养箱中预培养一段时间； 2.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡，它们会影响OD值的读数)； 3.将培养板置于培养箱内孵育1-4小时； 4.用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。 三.细胞增殖-毒性检测 1.在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)，将培养板放在培养箱中预培养24小时； 2.向培养板加入不同浓度的待测药物； 3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间； 4.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡)； 5.将培养板置于培养箱内孵育1-4小时； 6.用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次， 然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。 四.活力计算 细胞存活率*（%）=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100% 抑制率*（%）=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100% As:实验孔吸光度(含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液)； Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液，不含药物) ； Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液，不含细胞、药物) 。 保存条件 4℃避光保存，有效期12个月；-20℃避光保存，有效期24个月 实验应用 1. 细胞增殖测定：CCK-8是水溶性的，在培养基中稳定且无毒。 2. 细胞活性分析，包括细胞毒性：代谢活性以及染料的形成与细胞的活性和损伤成比例。 3. 细胞因子分析：测定细胞因子诱导的增殖，必要时，可在试验结束时回收和扩增细胞 注意事项 1.CCK-8的培养时间一般为1-4小时，但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察显色程度，根据细胞种类而定，需要摸索条件，CCK-8的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。 2.使用96孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问 题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS,水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 3.本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂 (例如一些抗氧化剂)会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 4.加入药物中如含有金属，对 CCK-8 显色有影响。终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%,15%,90% 的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话，将会100% 抑制。 5.培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。 6.本产品可以检测革兰氏阴性细菌，但不能检测革兰氏阳性细菌和酵母细胞。向100μL培养液中加入10μL CCK-8溶液，并培养1-4小时或过夜。 7.CCK-8试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深，OD值不断增加(注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的)。 8.要测定细胞的具体数量，建议同时做标准曲线。 9.建议采用多通道移液器，以减小平行孔间的差异。 10.以下方法可以终止CCK-8反应(96 孔板)：(a).在显色反应后，将培养板放置4°C冰箱内。(b).每孔加10μL 0.1M HCl溶液。(c).每孔加10μL 1% (w/v) 的SDS (十二烷基硫酸钠)溶液。注意：反应停止后，应在24小时内测定。 11. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。 12. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
NCM/新赛美 水浴锅抑菌剂
基本售价：399.00元
产品介绍 WaterBathCleaner（水浴锅抑菌剂）是一种即用型的，专门用于清除和抑制水浴锅中细 菌、真菌、支原体等微生物清除的一款产品。本品主要成分是一种阳离子表面活性剂， 系广谱杀菌剂，能改变细菌胞浆膜通透性，使菌体胞浆物质外渗，阻碍其代谢而起杀灭 作用。能够有效清除细胞培养的各类细菌、真菌、支原体等微生物，尤其对水中的细菌、 真菌及其芽孢和孢子抑制可长达 7天。 产品特色 安全性：使用浓度下对皮肤和组织无刺激性，无任何不良反应 高效广谱杀菌剂，对细菌、真菌、支原体等杀力强 对金属、橡胶制品无腐蚀作用 安全长效，抑制效果长达 7天 操作步骤 1.本品水浴锅抑菌剂以 1000倍的浓缩液形式提供，初次使用建议先清洁水浴锅， 2.然后直接按照 1:1000的比例向水浴锅中加入本品 保存条件 室温保存运输，至少 1年有效； 注意事项 1.本品仅供科研使用，勿做其他用途 2.使用本试剂前请仔细阅读说明书 3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
NCM/新赛美 超敏ECL化学发光试剂盒
基本售价：459.00元
产品介绍 NcmECL Ultra是新赛美生物科技有限公司研发的超敏ECL（Enhanced Chemiluminescent） 化学发光试剂，用于检测 HRP（辣根过氧化物酶）标记的目的条带，检测灵敏度最高可达飞 克（fg）级。NcmECL Ultra 优化了底物的成分，应用了新型的 Enhancer 和氧化剂，发光强度 更高，稳定性更好，不含有毒试剂，安全性更高。 产品特色 高灵敏度：最高可达飞克级别，10-15 g 安全性高：试剂不含对人体健康有毒的化学物质 信号持续时间长：发光时间长达 30 分钟以上 稳定性高：室温运输稳定性好 经济节约：较同类进口试剂花费更少，所需抗体少，抗体稀释度高 操作步骤 1. 准备工作稀释液，将 NcmECL Ultra Luminol/Enhancer Reagent (A) 和 NcmECL Ultra Stabilized Peroxide Reagent (B) 按体积比例 1:1 混合 注：为了获得最佳效果，使用前准备稀释液并立即使用。吸取 NcmECL Ultra 不同 组份时要换移液管，以免污染试剂。 2. 从 TBST 或 PBST 缓冲液的托盘中取出膜，小心移去膜上的多余缓冲液，但不要让膜干燥。 3. 将膜上有蛋白的一面朝上平整地铺在一张纸板上，加上配好的工作稀释液。用量以覆 盖膜为基准，1ml 工作液可以覆盖大约 10cm2的膜。 4. 将膜与工作稀释液孵育 1-5min，以确保整个表面覆盖。 5. 通过放射自显影胶片或成像设备获取信号。对于一个未知的信号，可调节不同曝光的 时间来获得最佳结果。 保存条件 室温运输，请于 4℃保存，有效期为 2 年。
NCM/新赛美 超敏ECL化学发光试剂盒
基本售价：1600.00元
产品介绍 NcmECL Ultra是新赛美生物科技有限公司研发的超敏ECL（Enhanced Chemiluminescent） 化学发光试剂，用于检测 HRP（辣根过氧化物酶）标记的目的条带，检测灵敏度最高可达飞 克（fg）级。NcmECL Ultra 优化了底物的成分，应用了新型的 Enhancer 和氧化剂，发光强度 更高，稳定性更好，不含有毒试剂，安全性更高。 产品特色 高灵敏度：最高可达飞克级别，10-15 g 安全性高：试剂不含对人体健康有毒的化学物质 信号持续时间长：发光时间长达 30 分钟以上 稳定性高：室温运输稳定性好 经济节约：较同类进口试剂花费更少，所需抗体少，抗体稀释度高 操作步骤 1. 准备工作稀释液，将 NcmECL Ultra Luminol/Enhancer Reagent (A) 和 NcmECL Ultra Stabilized Peroxide Reagent (B) 按体积比例 1:1 混合 注：为了获得最佳效果，使用前准备稀释液并立即使用。吸取 NcmECL Ultra 不同 组份时要换移液管，以免污染试剂。 2. 从 TBST 或 PBST 缓冲液的托盘中取出膜，小心移去膜上的多余缓冲液，但不要让膜干燥。 3. 将膜上有蛋白的一面朝上平整地铺在一张纸板上，加上配好的工作稀释液。用量以覆 盖膜为基准，1ml 工作液可以覆盖大约 10cm2的膜。 4. 将膜与工作稀释液孵育 1-5min，以确保整个表面覆盖。 5. 通过放射自显影胶片或成像设备获取信号。对于一个未知的信号，可调节不同曝光的 时间来获得最佳结果。 保存条件 室温运输，请于 4℃保存，有效期为 2 年。
NCM/新赛美 无血清细胞冻存液
基本售价：399.00元
产品介绍 CELLSAVINGTM是一种无血清细胞冻存液，通用于各种动物细胞株（肿瘤细胞和常规细胞）， 冻存细胞可在-80℃长期保存（>5 年）。CELLSAVINGTM配方成分明确，不含动物来源性蛋白， 不含血清，可减少各类细菌、病毒和支原体等污染，保证冻存细胞的安全。该冻存液含 DMSO、 葡萄糖等各种细胞营养成分，提高细胞存活率和活力，亦适合于无血清培养细胞和蛋白表达 细胞。 产品特色 即用型细胞冻存液 直接冻存于-80℃冰箱，长期保存（>5 年），不需要程序性降温 高安全性，病毒、病菌和支原体等污染可能性低 细胞存活率和活力高，批次性差异小 操作步骤 细胞冻存步骤 1. 常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中。 2. 根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。 3. 将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中，1000rmp，5 分钟离心收集培养细胞沉淀，彻底 弃去离心管中的上清液。 4. 加入适量的 CELLSAVINGTM 细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度约为 5×105-1×107 /ml。轻 柔地混匀细胞，制成细胞混合液。 5. 将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中，建议每管 1ml 或 1.5ml。 6. 直接将分装好的细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中，可长期冷冻保存。 7. 如果想液氮中长期保存，需先放入-80℃冰箱至少一天时间，方可移至液氮罐中保存。 冻存细胞复苏步骤 1. 从冰箱中取出冻存的细胞，立即放入 37℃水浴槽中快速解冻。 2. . 待冻存管中细胞混合液完全融化后，立即加入 1ml 细胞培养基于冷冻管中与细胞混合， 将其中的混合液移至含有约 5ml 该细胞培养基的离心管中，1000rmp，5 分钟离心收集冻 存细胞沉淀，移去上清液（操作时小心，切勿将细胞沉淀移去）。 3. 加入适量的新鲜细胞培养基，使用移液管缓缓加入到细胞沉淀，轻柔地混匀，将细胞混 合液移至事先准备好的培养容器中。 4. 镜检细胞后，可根据各自研究的需要和方法经行细胞常规培养。 保存条件 常温运输，4℃保存，长期不用，-20℃保存，有效期 36 个月 质量保障 CELLSAVINGTM细胞冻存液经过严格的内毒素、渗透压、病原体和 pH 检验，确保产品 不含病菌、病毒以及支原体等。用于常规的细胞冻存，-80℃可长期保存（>5 年），细胞 存活率在 90-98%。 注意事项 1.CELLSAVING TM 在冻存细胞分装后，应减少在外存放时间，尽快移入到-80 ℃超低温 冰箱。 2.对于干细胞（ES 细胞）等冻存时，我们建议用户在使用前，事先对所冻存的胞进行 至少为期 1 周的该产品试验性细胞冷冻保存培养，确认性能后再进行正式冻存。 3. CELLSAVINGTM含有 10%DMSO，部分对 DMSO 敏感的细胞，建议对其进行至少 1 周 的本产品试验性的细胞冻存培养，确认性能后再正式冻存。 免责声明: 本公司将不为任何不正常使用此产品时所发生的意外负责
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