AMFP胎牛血清是一款适用于常规细胞系、传代细胞系及部分原代细胞的培养的优级胎牛血清适用细胞类型:293、293T、CHO、Vero、SF-9等传代细胞Hela、A549、HepG2、MCF-7、HeDG2等肿瘤细胞MRC-5、KMB-17、2BS等二倍体细胞乳腺癌细胞(MDA-MB-231)、鼻咽癌细胞(NPC;SUNE1;CNE1;CNE2;HNE1;HONE1:HNE2;TW03)、结肠癌(CT-26;HCT116;HT-29;HCT8;LoVo;MC38)、胰腺癌(Panco2)、膀胱痘(T24)、肝细胞(Huh7)等肿瘤细胞;B细胞、SP2/0等骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞;本血清血源源自非疫区的南美,并在南美加工生产,产品经3级100nm过滤,符合国际知名胎牛血清检测标准。适用于部分原代细胞及其他细胞的培养。原装进口、高质低价。1.内毒素含量≤5EU/ml2.血红蛋白含量≤0.02%(w/v)3.促细胞生产曲线峰值>1.5x106/ml4.细胞倍增时间<16小时5.细胞克降率>85%6.BVD、PI3、IBR检测均为阴性(未检出)
Cell Store无血清细胞冻存液使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8721 Cell Store Cell Freezing Media 100ml/500ml 使用说明书 1份 【保存条件】 室温运输,2-8°C保存18个月,-20°C保存36个月 【概述】 Cell Store系列细胞冻存液可稳定长期储存细胞。凭借其独特的配方,可在冻融程序后实现稳定的冷冻保存和高存活率,是存储任何细胞类型(包括敏感细胞系)的值得信赖的解决方案。 本品可以用于常规细胞/肿瘤细胞/干细胞等细胞冻存,-80℃可长期保存(>5年),细胞存活率在90-98%,无需程序降温。 【产品特点】 l 即用型细胞冻存液 l 直接冻存于-80℃冰箱,长期保存(>5年),无需程序性降温 l 无血清及其它蛋白质成份 l 细胞存活率高于传统DMSO血清方法 【使用建议(仅供参考)】 细胞冻存步骤 1. 常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中。 2. 根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。 1. 通过离心(3-5分钟,1,000~2,000rpm)收集培养细胞沉淀,彻底去除离心管中上清液。 2. 加入适量CellStore无血清细胞冻存液于离心管中(每1 ml冻存液可用于5×105-1×107细胞),轻柔混匀细胞制成细胞混合液。 3. 将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中,建议每管1ml或1.5ml,标识细胞系名称、细胞浓度、传代日期和其他重要信息。 4. 直接将分装好的细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中,可长期冷冻保存。 5. 若需转移至液氮中长期保存,需先放入-80℃冻存至少24小时后方可移至液氮罐中保存。 重要提示:最佳方案可能会随细胞类型而变化。 冻存细胞复苏步骤 1. 从冰箱或液氮中取出冻存的细胞,立即置于37℃水浴中快速解冻。 2. 待冻存管中细胞混合液完全融化后,立即加入1ml 细胞培养基于冷冻管中与细胞混合, 再将其中的混合液移至含有约5ml该细胞培养基的离心管中,1,000~2,000rpm离心3-5分钟收集细胞沉淀,移弃上清液(操作时小心,切勿将细胞沉淀移去) 3. 使用适当体积的完全细胞培养基轻轻悬浮细胞,后转入至细胞培养平板或培养瓶。 4. 使用显微镜观察后,可根据各自研究所需的方案继续进一步的培养。 【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途,不得用于临床或诊断相关研究 2. 对于敏感型复杂细胞系,建议在使用前对所冻存的胞进行至少为期1周的该产品试验性细胞冷冻保存培养,确认性能后再进行正式冻存 3. 请注意冻存过程中的无菌操作。
产品介绍:通用型抗体稀释液是一种即用型的,适合于稀释所有免疫抗体测定(Immunofluorescence, IHC, ELISA, WB)实验中的抗体。该试剂可用于一抗或二抗的稀释和配制,在4℃保存和使用不少于六个月。稀释液中加入了多种抗体结合反应增强剂及稳定剂,能够增加抗体的溶解度和稳定性,增强免疫反应,降低非特异的背景颜色,提高实验的特异性和灵敏度。可反复使用,节约宝贵的抗体。试剂中不含有动物源的蛋白、磷酸盐、叠氮钠或硫柳汞类防腐剂,适合于所有类型抗体稀释,包括HRP,AP标记的抗体。产品特色:1.即用型稀释液,无需配制2.稀释后的抗体可以使用长达6个月3.适用所有实验的抗体稀释(IF、IHC、ELISA、WB)4.含抗体结合反应增强剂、稳定剂,效果更佳5.不含 BSA、脱脂奶粉等动物源蛋白6.不含磷酸盐、叠氮钠或硫柳汞类防腐剂 运输和保存条件:常温运输,4℃存储,有效期两年。使用说明:1.根据抗体使用说明书,直接用本品对一抗或二抗进行适当倍数的稀释。2.保存在抗体稀释液中的抗体可回收于4℃保存,可反复使用多次,长达6 个月以上,直至不能达到理想结果后丢弃。注意事项:1.使用后请旋紧瓶盖,防止溶液挥发或与空气的物质发生化学反应,并放回4℃保存。2.在进行抗体免疫反应前可以使用Genefist的无蛋白封闭液(货号GF1813)进行封闭,能进一步提高条带的清晰度,减少显色后的高背景和杂带的产生 。3.本品不含叠氮钠或硫柳汞类防腐剂,但含安全性更高的防腐剂,还需小心操作避免皮肤直接接触。4. 本试剂只能用于科研实验,请勿用于临床诊断和其它用途。
产品介绍:通用型抗体稀释液是一种即用型的,适合于稀释所有免疫抗体测定(Immunofluorescence, IHC, ELISA, WB)实验中的抗体。该试剂可用于一抗或二抗的稀释和配制,在4℃保存和使用不少于六个月。稀释液中加入了多种抗体结合反应增强剂及稳定剂,能够增加抗体的溶解度和稳定性,增强免疫反应,降低非特异的背景颜色,提高实验的特异性和灵敏度。可反复使用,节约宝贵的抗体。试剂中不含有动物源的蛋白、磷酸盐、叠氮钠或硫柳汞类防腐剂,适合于所有类型抗体稀释,包括HRP,AP标记的抗体。产品特色:1.即用型稀释液,无需配制2.稀释后的抗体可以使用长达6个月3.适用所有实验的抗体稀释(IF、IHC、ELISA、WB)4.含抗体结合反应增强剂、稳定剂,效果更佳5.不含 BSA、脱脂奶粉等动物源蛋白6.不含磷酸盐、叠氮钠或硫柳汞类防腐剂 运输和保存条件:常温运输,4℃存储,有效期两年。使用说明:1.根据抗体使用说明书,直接用本品对一抗或二抗进行适当倍数的稀释。2.保存在抗体稀释液中的抗体可回收于4℃保存,可反复使用多次,长达6 个月以上,直至不能达到理想结果后丢弃。注意事项:1.使用后请旋紧瓶盖,防止溶液挥发或与空气的物质发生化学反应,并放回4℃保存。2.在进行抗体免疫反应前可以使用Genefist的无蛋白封闭液(货号GF1813)进行封闭,能进一步提高条带的清晰度,减少显色后的高背景和杂带的产生 。3.本品不含叠氮钠或硫柳汞类防腐剂,但含安全性更高的防腐剂,还需小心操作避免皮肤直接接触。4. 本试剂只能用于科研实验,请勿用于临床诊断和其它用途。
产品简介: SDS-PAGE 上样缓冲液(SDS-PAGE Loading Buffer, 5X),是一种经过改良的以溴酚蓝为染料,5 倍浓缩的蛋白上样缓冲液,用于 SDS-PAGE 时蛋白样品的上样操作。本产品不含传统的 β-巯基乙醇或 DTT,采用 TCEP作为还原剂,稳定性更好、还原效果更高,并且无难闻气味!由于含有变性剂,本产品不适用于非变性胶的电泳。 保存条件: -20℃保存,至少两年有效。 使用说明: 1、 在 37℃水浴中溶解蛋白上样缓冲液。 注意: Loading buffer 里含有大量甘油,有助于样品沉淀至加样孔底部,低温下试剂组分在甘油里容易析出,使用前一定要确保蛋白上样缓冲液充分溶解。 2、 按照每 4ul 蛋白样品加入 1ul 上样缓冲液的比例,混合蛋白样品和上样缓冲液。 3、 100℃或沸水浴加热 5-10 分钟,以充分变性蛋白。 注意:如果起始时细胞或组织的用量较大,基因组 DNA 含量较高,煮沸 5-10 分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体,此时需要延长煮沸时间,或者加入适量稀释成 1X 的蛋白上样缓冲液再煮 3-5 分钟。充分煮沸可以使结合在基因组 DNA 上的蛋白充分释放,同时会导致基因组 DNA 的部分断裂,从而使粘稠感消失,这样就不会影响后续的上样操作。 4、 冷却到室温后,离心取上清上样到 SDS-PAGE 胶加样孔内,开始电泳。 5、 通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近,即可停止电泳。 注意事项: 由于含有变性剂,本品不适用于非变性胶的电泳 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(5X)必须完全溶解后再使用。 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗。 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品简介: SDS-PAGE 上样缓冲液(SDS-PAGE Loading Buffer, 5X),是一种经过改良的以溴酚蓝为染料,5 倍浓缩的蛋白上样缓冲液,用于 SDS-PAGE 时蛋白样品的上样操作。本产品不含传统的 β-巯基乙醇或 DTT,采用 TCEP作为还原剂,稳定性更好、还原效果更高,并且无难闻气味!由于含有变性剂,本产品不适用于非变性胶的电泳。 保存条件: -20℃保存,至少两年有效。 使用说明: 1、 在 37℃水浴中溶解蛋白上样缓冲液。 注意: Loading buffer 里含有大量甘油,有助于样品沉淀至加样孔底部,低温下试剂组分在甘油里容易析出,使用前一定要确保蛋白上样缓冲液充分溶解。 2、 按照每 4ul 蛋白样品加入 1ul 上样缓冲液的比例,混合蛋白样品和上样缓冲液。 3、 100℃或沸水浴加热 5-10 分钟,以充分变性蛋白。 注意:如果起始时细胞或组织的用量较大,基因组 DNA 含量较高,煮沸 5-10 分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体,此时需要延长煮沸时间,或者加入适量稀释成 1X 的蛋白上样缓冲液再煮 3-5 分钟。充分煮沸可以使结合在基因组 DNA 上的蛋白充分释放,同时会导致基因组 DNA 的部分断裂,从而使粘稠感消失,这样就不会影响后续的上样操作。 4、 冷却到室温后,离心取上清上样到 SDS-PAGE 胶加样孔内,开始电泳。 5、 通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近,即可停止电泳。 注意事项: 由于含有变性剂,本品不适用于非变性胶的电泳 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(5X)必须完全溶解后再使用。 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗。 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件室温(15-25℃)可稳定保存1年以上。低温贮存可能会产生沉淀或晶体析出,用之前需37℃完全溶解沉淀。产品介绍RNAstore是一种液态的、无毒的组织保存试剂。它能迅速渗入组织细胞中,通过抑制RNase活性从而保护非冷冻细胞RNA于原位,使其更适合于组织基因表达谱的分析。获得组织块后,迅速浸泡在RNAstore中保存,而不会引起RNA的降解,这样可以不必马上处理样本,也不必将样本冷冻在液氮之中。RNAstore可广泛应用于多种脊椎动物样本。包括脑、心、肾、脾、肝、肺和胸腺。推荐不同组织样品的RNAstore使用量:注意事项1.RNAstore只能用于新鲜组织,在浸入RNAstore之前不能冷冻组织。2.要求组织样本任何一边的最大厚度不能大于0.5 cm, 然后将组织块放入到10倍体积的RNAstore中保存。如果组织样品厚度过大,RNAstore渗入组织样本中的速度将会减慢造成RNA降解。所以如果厚度超过0.5 cm需简单切碎组织后再在RNAstore中贮存。操作步骤1.切割组织前估计加入RNAstore中的组织重量,并根据加入至少10倍体积组织的量确定RNAstore的使用量(举例:组织100 mg需1 ml RNAstore)2.切割组织后放入RNAstore中。如果组织样本过大需剪切成任何一边的最大厚度不能大于0.5 cm。注意:为完全有效的保护组织样本,该组织样本应完全浸没入RNAstore中并且组织样本的任何一边的最大厚度不应超过0.5 cm。3.贮存于RNAstore中的样品组织4℃可至少保存1个月、室温1周和37℃ 1天。对于-20℃或-80℃长期保存,先将样本在4℃条件下过夜渗透,然后将组织从RNAstore中取出后放入-20℃或-80℃长期保存。样本可随后在室温下解冻及再冻存,其RNA的质和量都不会受影响。注意:建议组织样品在RNAstore中低温保存 (4℃可至少保存1个月,-20℃或-80℃长期保存),不建议37℃或室温保存。冻存于-20℃或-80℃的组织可反复冻融至少20次不影响RNA提取。保存于RNAstore中的组织如果需要长途运输,运输过程中需要确保组织完全浸入RNAstore中。4.从RNAstore中取出样品就可以用RNA提取的试剂盒 (Trizol,RNAprepPure, RNAsimple)直接提取RNA。其它应用1.该试剂不适合于保存植物叶片,其表面的腊表皮使RNAstore很难完全渗入组织中。2.对于组织培养细胞的操作,先沉淀细胞,用PBS洗一次,再用少量的PBS悬浮细胞,后加2倍体积的RNAstore保存。后续RNA的提取可以采用直接离心去除RNAstore后进行RNA提取,也可以不用去除RNAstore直接加入RNA提取裂解液进行直接提取。离心法:因为RNAstore的介质浓度比典型的细胞培养介质的浓度高,因此用通常沉淀活细胞的离心力无法沉淀RNAstore中的细胞。离心沉淀细胞,去除RNAstore。(HeLa细胞大约需要3000×g,但其他细胞可能不能容忍这个速度,或者他们需要更大的离心力。)直接提取法:通过向细胞混合物中加入10倍体积的RNA提取试剂来完成。3.对于细菌的操作,先离心收集细菌,用PBS洗一次,再用少量的PBS悬浮细胞,加入2倍体积的RNAstore保存。后续RNA的提取参照组织细胞的提取步骤。大肠杆菌保存在RNAstore中4℃条件下1个月仍很完整,产生不降解的RNA。4.对于全血中白细胞的保存,需将白细胞从红细胞和血清中分离出来,并按组织培养细胞一样处理后,白细胞便能有效地保存在RNAstore中。不要将全血、血浆或血清中的RNA保存在RNAstore中,因为它们蛋白含量过高,与RNAstore混合后易形成不溶的沉淀。
储存条件室温(15-25℃)可稳定保存1年以上。低温贮存可能会产生沉淀或晶体析出,用之前需37℃完全溶解沉淀。产品介绍RNAstore是一种液态的、无毒的组织保存试剂。它能迅速渗入组织细胞中,通过抑制RNase活性从而保护非冷冻细胞RNA于原位,使其更适合于组织基因表达谱的分析。获得组织块后,迅速浸泡在RNAstore中保存,而不会引起RNA的降解,这样可以不必马上处理样本,也不必将样本冷冻在液氮之中。RNAstore可广泛应用于多种脊椎动物样本。包括脑、心、肾、脾、肝、肺和胸腺。推荐不同组织样品的RNAstore使用量:注意事项1.RNAstore只能用于新鲜组织,在浸入RNAstore之前不能冷冻组织。2.要求组织样本任何一边的最大厚度不能大于0.5 cm, 然后将组织块放入到10倍体积的RNAstore中保存。如果组织样品厚度过大,RNAstore渗入组织样本中的速度将会减慢造成RNA降解。所以如果厚度超过0.5 cm需简单切碎组织后再在RNAstore中贮存。操作步骤1.切割组织前估计加入RNAstore中的组织重量,并根据加入至少10倍体积组织的量确定RNAstore的使用量(举例:组织100 mg需1 ml RNAstore)2.切割组织后放入RNAstore中。如果组织样本过大需剪切成任何一边的最大厚度不能大于0.5 cm。注意:为完全有效的保护组织样本,该组织样本应完全浸没入RNAstore中并且组织样本的任何一边的最大厚度不应超过0.5 cm。3.贮存于RNAstore中的样品组织4℃可至少保存1个月、室温1周和37℃ 1天。对于-20℃或-80℃长期保存,先将样本在4℃条件下过夜渗透,然后将组织从RNAstore中取出后放入-20℃或-80℃长期保存。样本可随后在室温下解冻及再冻存,其RNA的质和量都不会受影响。注意:建议组织样品在RNAstore中低温保存 (4℃可至少保存1个月,-20℃或-80℃长期保存),不建议37℃或室温保存。冻存于-20℃或-80℃的组织可反复冻融至少20次不影响RNA提取。保存于RNAstore中的组织如果需要长途运输,运输过程中需要确保组织完全浸入RNAstore中。4.从RNAstore中取出样品就可以用RNA提取的试剂盒 (Trizol,RNAprepPure, RNAsimple)直接提取RNA。其它应用1.该试剂不适合于保存植物叶片,其表面的腊表皮使RNAstore很难完全渗入组织中。2.对于组织培养细胞的操作,先沉淀细胞,用PBS洗一次,再用少量的PBS悬浮细胞,后加2倍体积的RNAstore保存。后续RNA的提取可以采用直接离心去除RNAstore后进行RNA提取,也可以不用去除RNAstore直接加入RNA提取裂解液进行直接提取。离心法:因为RNAstore的介质浓度比典型的细胞培养介质的浓度高,因此用通常沉淀活细胞的离心力无法沉淀RNAstore中的细胞。离心沉淀细胞,去除RNAstore。(HeLa细胞大约需要3000×g,但其他细胞可能不能容忍这个速度,或者他们需要更大的离心力。)直接提取法:通过向细胞混合物中加入10倍体积的RNA提取试剂来完成。3.对于细菌的操作,先离心收集细菌,用PBS洗一次,再用少量的PBS悬浮细胞,加入2倍体积的RNAstore保存。后续RNA的提取参照组织细胞的提取步骤。大肠杆菌保存在RNAstore中4℃条件下1个月仍很完整,产生不降解的RNA。4.对于全血中白细胞的保存,需将白细胞从红细胞和血清中分离出来,并按组织培养细胞一样处理后,白细胞便能有效地保存在RNAstore中。不要将全血、血浆或血清中的RNA保存在RNAstore中,因为它们蛋白含量过高,与RNAstore混合后易形成不溶的沉淀。
储存条件“裂解液RS” 和 “DNase I”,储存于-20℃;其他试剂室温(15-25℃)保存。产品简介本试剂盒所含“裂解液 RS”,采用我司独特的“SDS/抗氧化”的方式,可适用于广泛的植物组织,包含草本植物与本本植物的叶片、具高粘性的多糖多酚类及种子胚乳的植物样本;此提取方案,增加了额外步骤去除多酚和多糖,RNA 的提取总量更高。提取的总 RNA 纯度高,基本没有基因组、蛋白和其它杂质的污染,可用于 PCR、Blot、分子克隆等多种下游实验。预防RNase污染,应注意以下几方面1.经常更换新手套,因为皮肤带有细菌,可能导致RNase污染;使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。2.RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min,然后用水清洗再灭菌,即可去除RNase。3.配制溶液应使用无RNase的水(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%(V/V),高压灭菌)。使用前注意事项1.裂解液 RS:使用前请于 50℃水浴将裂解液完全回溶,并添加 450ul 巯基乙醇;添加过巯基乙醇的裂解液 RS 继续保存于-20℃(建议将添加过巯基乙醇的裂解液 RS 于无酶管分装成小量,再保存于-20℃)。2.溶液 BC:使用前请添加 30ml 无水乙醇。3.漂洗液 PW:使用前请添加 64ml 无水乙醇。4.为确保 RNA 的品质及产量,应尽量收取新鲜的动物组织进行 RNA 提取,或将组织立即以液氮冷冻,储存于-70℃,组织亦可保存在 RANstore 样本保存液(目录号:TR38)中。5.凤梨和兰花推荐采用“裂解液 RL”(kit 产品目录 TR02)操作步骤1.匀浆处理:50-100 mg 植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末,加入 450 μl 裂解液 RS(使用前请先检查是否已加入 β-巯基乙醇),立即涡旋剧烈震荡混匀,并于 56℃孵育 5-10 分钟,每隔一段时间可翻转混合离心管。注意:由于植物多样性非常丰富,而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的 RNA 含量都不相同,请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。2.加入 150ul 的溶液 GP 至裂解液中,混合均匀,于冰上孵育 5 分钟,12,000rpm(~13,400×g)离心 5 min。注意:溶液会呈现雾状,为界面活性剂、蛋白质、多糖及二次代谢物的沉淀物。3.移取上清液至过滤柱 CS1 上(过滤柱 CS1 放在收集管中),12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min。4.小心吸取收集管中的上清至新的 RNase-Free 离心管中,吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。5.向溶液中加入 1.5 倍体积的溶液 BC(已添加无水乙醇),以震荡或移液器吸吐混合均匀。注意:加入溶液 BC 后会形成丝状沉淀物,不影响 RNA 提取。6.移取混合液(连同沉淀物一起)至吸附柱 CR1(吸附柱 CR1 放在收集管中),12,000 rpm(~13,400×g) 离心1 min,丢弃滤液,将吸附柱 CR1 放回收集管中。注意:如果混合液体积大于吸附柱容量,可以分次完成。7.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW,12,000rpm(~13,400×g)离心 1min,丢弃滤液,将吸附柱 CR1 放回收集管中。8.DNase Ⅰ降解。每一纯化反应,请将 80 ul DNase 消化液与 10ul DNaseⅠ预先混合在新的离心管(轻弹或翻转离心管以混合均匀,请勿震荡),将 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心,于室温(25~28℃)孵育 15 分钟。注意:如同时操作多组样本,请使用前现配新鲜的 DNaseⅠ工作液,请勿预先配制保存 DNaseⅠ工作液。9.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW,12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CR1 放回收集管中。10.向吸附柱 CR1 中加入 600 μl 漂洗液 PW(使用前请先检查是否已加入乙醇),12,000 rpm(~13,400×g) 离心 1 min,丢弃滤液,将吸附柱 CR1 放回收集管中。11.重复操作步骤 10。12.12,000rpm(~13,400×g)离心 3 min,将吸附柱 CR1 置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附柱中残余的乙醇。注意:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,离心后将吸附柱 CR1 在室温放置片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续的 RT 等实验。13.将吸附柱 CR1 转入一个新的 RNase-Free 离心管中,加入 30-100 μl 无酶双蒸水至吸附柱的膜中心,室温静置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min,得到 RNA 溶液。注意:洗脱液体积不应少于 30μl,体积过小影响回收效率。为了增加产量,可将步骤 13 得到的 RNA 溶液再加入吸附柱 CR1,放置2min,12,000rpm(~13,400×g)离心 1min,得到 RNA 溶液。RNA 溶液-70℃中保存。附录:从高度黏稠性的富含多酚及多糖成分的样本中提取 RNA樟科植物样本,在裂解后粘稠度高、移取困难,可直接于过滤柱中进行裂解,以减少移液器吸取的步骤。1.将过滤柱 CS1 于冰上预冷,秤取不超过 30mg 的样本组织,于液氮中迅速研磨,并将研磨的样本直接转移至预冷的过滤柱 CS1 里(过滤柱 CS1 放在收集管中)。2.加入 600ul 裂解液 RS(已添加巯基乙醇)至过滤柱,于 60℃金属浴孵育 10 分钟。3.12,000 rpm(~13,400×g)离心 5 min,将收集管中的滤液移取至新的 1.5ml 离心管,请避免吸取到沉淀物。注意:有些样本可能会堵塞过滤柱,可再次离心,或将管柱中剩余的裂解液移至新的过滤柱 CS1 再次离心。4.加入 1/3 倍体积的溶液 GP 至滤液中,混合均匀,于冰上孵育 5 分钟,12,000 rpm(~13,400×g)离心离心 5min,将上清液小心转移至新的 1.5ml 离心管,不要触碰或移取固体沉淀。转至上面“操作步骤 5”。
储存条件DNase I(DNase I 冻干粉溶解于专用保存液),储存于-20℃;其他试剂室温(15-25℃)保存。产品简介由于植物的细胞结构和代谢活性在物种、组织类型和发育阶段之间可能存在显著差异,因此没有一种通用的裂解溶液或独特的方法可以同样适用于所有植物样品。GF432 试剂盒所含“裂解液 RL”,是依据硫氰酸胍的原理,可用于许多植物组织,此裂解液操作简单快速,提取量稳定,可同时处理大量不同样品。本试剂盒提取的总 RNA 纯度高,基本没有基因组、蛋白和其它杂质的污染,可用于 PCR、Blot、分子克隆等多种下游实验。对于富含淀粉、多酚和次级代谢物(如一些木本植物、胚乳、块茎以及丝状真菌的菌丝体)的植物组织,因为“裂解液 RL”加入后,会使样本变粘稠甚至凝固,建议选用另一裂解方案(产品目录号:TR02 或者GF441)。预防RNase污染,应注意以下几方面1.经常更换新手套,因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。2.使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。3.RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。4.配制溶液应使用无RNase的水(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%(V/V),高压灭菌)。使用前注意事项1.裂解液 RL:使用前请添加 300ul 巯基乙醇,添加过巯基乙醇的裂解液 4℃保存。2.漂洗液 PW:使用前请添加 64ml 无水乙醇。3.为确保 RNA 的品质及产量,应尽量收取新鲜的动物组织进行 RNA 提取,或将组织立即以液氮冷冻,储存于-70℃,组织亦可保存在 RANstore 样本保存液(目录号:TR38)中。操作步骤本试剂盒不适用于富含淀粉、酚类和次级代谢物的植物组织(例如一些木本植物,胚乳或丝状真菌的菌丝体),因为“裂解液 RL”在加入至样本粉末后,会变固态或非常粘稠,此类植物组织请使用另一裂解方案(产品目录号:TR02)。1.匀浆处理50-100 mg 植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末,加入 450 μl RL(使用前请先检查是否已加入 β-巯基乙醇),涡旋剧烈震荡混匀,并于 56℃孵育 3 分钟。注意 1:在 56℃孵育 1-3 min 将有助于植物组织裂解,但是对于某些富含淀粉的样品,请不要加热处理,防止因淀粉引起的样品膨胀现象。注意 2:由于植物多样性非常丰富,而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的 RNA 含量都不相同,请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。2.将所有溶液转移至过滤柱 CS1 上(过滤柱 CS1 放在收集管中),12,000 rpm(~13,400×g)离心 2-5 min,小心吸取收集管中的上清至 RNase-Free 的离心管中,吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。注意:由于裂解液较粘稠,所以将溶液转移至过滤柱时,可以剪去部分吸头末端。3.缓慢加入 0.5 倍上清体积的无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀),转至“RNA 提取”步骤。4.将所得“裂解液/乙醇混合液”(含沉淀),移取至吸附柱 CR1 中(吸附柱 CR1 放入收集管中),12,000 rpm(~13,400×g )离心 30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱 CR1 放回收集管中。注意:将溶液和沉淀转移至吸附柱 CR1 时,如果体积大于吸附柱容量,可以分次完成。5.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW,12,000 rpm (~13,400×g )离心离心 1 min,丢弃滤液,将吸附柱CR1 放回收集管中。6.DNase Ⅰ降解。每一纯化反应,请将 80 ul DNase 消化液与 10ul DNaseⅠ预先混合在新的离心管(轻弹或翻转离心管以混合均匀,请勿震荡),将 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心,于室温(25~28℃)孵育15 分钟。注意:如同时操作多组样本,请使用前现配新鲜的 DNaseⅠ工作液,请勿预先配制保存 DNaseⅠ工作液。7.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW,12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱 CR1 放回收集管中。8.向吸附柱 CR1 中加入 600μl 漂洗液 PW(使用前请先检查是否已加入乙醇),12,000 rpm(~13,400×g) 离心 1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱 CR1 放回收集管中。9.重复操作步骤 8。10.12,000 rpm(~13,400×g)离心 3 min,将吸附柱 CR1 置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。注意:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,离心后将吸附柱 CR1 在室温放置片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续的 RT 等实验。11.将吸附柱 CR1 转入一个新的 RNase-Free 离心管中,加入 30-100 μl 无酶双蒸水至吸附柱的膜中心,室温静置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min,得到 RNA 溶液。注意:洗脱缓冲液体积不应少于 30 μl,体积过小影响回收效率;RNA 溶液请于-70℃保存。