产品描述本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。预混液中已经将DNA聚合酶、精心优化的反应Buffer、dNTPs、SYBR Green I等试剂预混在一起,是一种2×浓度的预混型试剂,进行实验时,PCR反应液的配制十分简单方便。本制品使用新型抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,并结合精心优化的反应Buffer,具有更高的扩增灵敏度,反应特异性和扩增效率,能够在更宽广的范围内进行准确定量。产品特点高灵敏度:Novoprotein精心配制的RealTime PCR专用2×SuperMix,具有更高的扩增灵敏度和扩增效率。高特异性:采用新型工艺制备抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,无需热启动即可进行PCR反应,大大提高PCR扩增的特异性。快捷:PCR反应所必需试剂集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。保存条件-20℃避光储存。如需在一段时间内经常取用,可在2~8℃条件下储存3个月。避免反复多次冻融。质量控制纯度检测:所有组分经检测均无核酸内切酶残留、核酸外切酶残留、核酸残留。使用建议使用:请上下颠倒轻轻混合均匀,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,避免污染。建议反应体积为20~50μl。引物设计:一般为了增加灵敏度及扩增效率且抑制非特异性反应,扩增目标序列越短越好。建议设计成200bp以下。仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。
产品描述本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。预混液中已经将DNA聚合酶、精心优化的反应Buffer、dNTPs、SYBR Green I等试剂预混在一起,是一种2×浓度的预混型试剂,进行实验时,PCR反应液的配制十分简单方便。本制品使用新型抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,并结合精心优化的反应Buffer,从而有效抑制低温下的非特异性扩增,提高反应特异性和扩增效率,能够在更宽广的范围内进行准确定量。产品特点高特异性:采用新型工艺制备抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,无需热启动即可进行PCR反应,大大提高PCR扩增的特异性。高效:Novoprotein精心配制的RealTime PCR专用2×SuperMix,具有更高的扩增效率和扩增灵敏度。快捷:PCR反应所必需试剂集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。保存条件-20℃避光储存。如需在一段时间内经常取用,可在2~8℃条件下储存3个月。避免反复多次冻融。质量控制纯度检测:所有组分经检测均无核酸内切酶残留、核酸外切酶残留、核酸残留。使用建议使用:请上下颠倒轻轻混合均匀,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,避免污染。建议反应体积为20~50μl。引物设计:一般为了增加灵敏度及扩增效率且抑制非特异性反应,扩增目标序列越短越好。建议设计成200bp以下。仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。
产品描述本制品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行快速 Real Time PCR 的 2×浓度预混型试剂,PCR 反应液的配制十分简单方便。本制品使用突变型 Taq DNA 聚合酶,结合精心优化的反应 Buffer,可有效抑制低温下的非特异性扩增,实现快速 PCR 反应,并且能够在宽广的范围内对靶基因进行准确、快速、可重复的定量检测。产品特点快速:实现快速荧光定量,相较于传统 qPCR,反应时间减少 50%左右;保存条件-20℃避光储存,避免反复冻融。使用建议使用:请上下颠倒轻轻混合均匀,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,避免污染。建议反应体积为20~50μl。仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。Novoprotein是苏州近岸蛋白质科技股份有限公司的注册商标。请访问我们的注册商标页面。其他商标是其他所有者的财产。
产品描述本制品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行快速 Real Time PCR 的 2×浓度预混型试剂,PCR 反应液的配制十分简单方便。本制品使用突变型 Taq DNA 聚合酶,结合精心优化的反应 Buffer,可有效抑制低温下的非特异性扩增,实现快速 PCR 反应,并且能够在宽广的范围内对靶基因进行准确、快速、可重复的定量检测。产品特点快速:实现快速荧光定量,相较于传统 qPCR,反应时间减少 50%左右;保存条件-20℃避光储存,避免反复冻融。使用建议使用:请上下颠倒轻轻混合均匀,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,避免污染。建议反应体积为20~50μl。仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。Novoprotein是苏州近岸蛋白质科技股份有限公司的注册商标。请访问我们的注册商标页面。其他商标是其他所有者的财产。
产品描述Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag®)是一种新兴的DNA-蛋白质互作研究方法。CUT&Tag® 以融合了protein A/G 的Tn5 转座酶为核心,融合蛋白通过protein A/G 与抗体结合,使得Tn5 被栓系在靶位点周围,从而在目的位点附近进行酶切反应,并同时引入二代测序所必需的接头序列,产物DNA 经过后续提取与PCR 扩增后,得到直接用于测序的文库。CUT&Tag®与传统的ChIP-Seq 技术相比较,实验不需要超声打断,也不需要传统的连接法添加测序接头,操作简单、周期短、信噪比高、重复性好、细胞用量少,为极低起始细胞量和单细胞测序研究提供了可能性。自 2019 年 CUT&Tag 技术诞生以来,经过大量的实践,发现该技术在组蛋白修饰及部分转录因子与 DNA 互作研究中可以获得高信噪比的结果,但是针对一些与 DNA 结合力较弱或者结合具有高度动态性的 DNA 结合蛋白,较难得到理想的实验结果。针对此问题,近岸蛋白开发了可对细胞进行高浓度甲醛交联的CUT&Tag实验流程。为转录因子 -DNA 互作研究提供一种新的思路,这种需要甲醛交联的CUT&Tag实验被称为fcCUT&Tag(formaldehyde crosslinking CUT&Tag)。NovoNGS® CUT&Tag® 4.0 High-Sensitivity Kit (for Illumina)试剂盒包含常规非交联细胞CUT&Tag及甲醛交联细胞fcCUT&Tag实验中所需的各种缓冲液、ConA磁珠、DNA纯化磁珠、引物等全套建库试剂,可以用于组蛋白修饰和转录因子的染色质结合状态研究。与传统的CUT&Tag试剂盒相比,该试剂盒既可以对自然状态的细胞进行蛋白质-DNA互作研究,也可以对高浓度甲醛交联的细胞进行蛋白质-DNA互作研究,一盒两用。试剂盒包含CUT&Tag® 实验中孵育抗体、转座体、构建文库的相关试剂,可以用于组蛋白修饰和转录因子的染色质结合状态研究。本试剂盒包含高活性的ChiTag® pAG-Tn5, 相较于最初版本的pA-Tn5 转座酶,pAG结构域对兔、鼠等多种来源抗体具有广谱的强亲和性,在实验抗体的选择上具有更大的空间。针对CUT&Tag®打断产物DNA 提取过程中小片段丢失的问题,本试剂盒提供优化的Tagment DNA Extract Beads, 相较于常规的片段分选磁珠可以完整的回收CUT&Tag® 产物中的小片段DNA, 大大简化了酚氯仿-乙醇沉淀法的繁琐操作。此外,本试剂盒还提供了阳性抗体H3K4me3(兔抗)以及相应的二抗(羊抗兔IgG) ,用于阳性对照实验(仅B 包装提供阳性抗体)。图1: DNA-Target Protein-Antibody-ChiTag®结合示意图 图2: CUT&Tag 实验流程简图 产品用途DNA-蛋白质互作研究。在常见的哺乳动物细胞上用于替代传统的ChIP-Seq 技术,特别适用于细胞数量较少的样本,也可应用于经过处理的植物和酵母样本上。保存条件详见说明书仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。
产品描述Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag®)是一种新兴的DNA-蛋白质互作研究方法。CUT&Tag® 以融合了protein A/G 的Tn5 转座酶为核心,融合蛋白通过protein A/G 与抗体结合,使得Tn5 被栓系在靶位点周围,从而在目的位点附近进行酶切反应,并同时引入二代测序所必需的接头序列,产物DNA 经过后续提取与PCR 扩增后,得到直接用于测序的文库。CUT&Tag®与传统的ChIP-Seq 技术相比较,实验不需要超声打断,也不需要传统的连接法添加测序接头,操作简单、周期短、信噪比高、重复性好、细胞用量少,为极低起始细胞量和单细胞测序研究提供了可能性。自 2019 年 CUT&Tag 技术诞生以来,经过大量的实践,发现该技术在组蛋白修饰及部分转录因子与 DNA 互作研究中可以获得高信噪比的结果,但是针对一些与 DNA 结合力较弱或者结合具有高度动态性的 DNA 结合蛋白,较难得到理想的实验结果。针对此问题,近岸蛋白开发了可对细胞进行高浓度甲醛交联的CUT&Tag实验流程。为转录因子 -DNA 互作研究提供一种新的思路,这种需要甲醛交联的CUT&Tag实验被称为fcCUT&Tag(formaldehyde crosslinking CUT&Tag)。NovoNGS® CUT&Tag® 4.0 High-Sensitivity Kit (for Illumina)试剂盒包含常规非交联细胞CUT&Tag及甲醛交联细胞fcCUT&Tag实验中所需的各种缓冲液、ConA磁珠、DNA纯化磁珠、引物等全套建库试剂,可以用于组蛋白修饰和转录因子的染色质结合状态研究。与传统的CUT&Tag试剂盒相比,该试剂盒既可以对自然状态的细胞进行蛋白质-DNA互作研究,也可以对高浓度甲醛交联的细胞进行蛋白质-DNA互作研究,一盒两用。试剂盒包含CUT&Tag® 实验中孵育抗体、转座体、构建文库的相关试剂,可以用于组蛋白修饰和转录因子的染色质结合状态研究。本试剂盒包含高活性的ChiTag® pAG-Tn5, 相较于最初版本的pA-Tn5 转座酶,pAG结构域对兔、鼠等多种来源抗体具有广谱的强亲和性,在实验抗体的选择上具有更大的空间。针对CUT&Tag®打断产物DNA 提取过程中小片段丢失的问题,本试剂盒提供优化的Tagment DNA Extract Beads, 相较于常规的片段分选磁珠可以完整的回收CUT&Tag® 产物中的小片段DNA, 大大简化了酚氯仿-乙醇沉淀法的繁琐操作。此外,本试剂盒还提供了阳性抗体H3K4me3(兔抗)以及相应的二抗(羊抗兔IgG) ,用于阳性对照实验(仅B 包装提供阳性抗体)。图1: DNA-Target Protein-Antibody-ChiTag®结合示意图图2: CUT&Tag 实验流程简图产品用途DNA-蛋白质互作研究。在常见的哺乳动物细胞上用于替代传统的ChIP-Seq 技术,特别适用于细胞数量较少的样本,也可应用于经过处理的植物和酵母样本上。保存条件详见说明书仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。Novoprotein是苏州近岸蛋白质科技股份有限公司的注册商标。请访问我们的注册商标页面。其他商标是其他所有者的财产。
产品介绍 EasyFusion Assembly Master Mix 是一种快速、简单且高效的定向同源重组克隆试剂盒,可将目的片段一个或多个 (PCR 产物)定向克隆到任意载体的任意位置。该技术不依赖于 T4 连接酶、不受载体和目的片段的酶切位点限制, 仅需 15-30 分钟实现高效无缝连接。 操作步骤 1.线性化载体准备 可以通过以下两种方法获得线性化载体,最终载体的浓度需>10 ng/μl。(高浓度的载体有利于提高效率)。 (1)选择合适的酶切位点线性化载体。(单酶切或双酶切均可, 5´端突出、3´端突出或平末端均适用) (2)以载体为模板,设计引物,通过 PCR 的方式扩增出需要的线性化载体 2.扩增插入片段引物设计 通常通过 PCR 获得目的片段,引物设计要保证目的片段两端有至少 15bp-20bp 序列与线性化载体的两端一致的 同源序列。PCR 每条引物长度至少在 35-40bp 之间,包括 5´ 端和 3´端与线性载体同源的 15bp-20bp(不包括酶 切位点)以及目的片段特异性序列 20-25bp。 (1)单个片段的引物设计: 引物包含目的基因特异性序列和重叠序列 插入片段正向扩增引物设计方式为: 5´-上游载体末端 15-20bp 同源序列+目的基因特异性正向扩增引物序列(20-25bp)-3´ 插入片段反向扩增引物设计方式为: 5´-下游载体末端 15-20bp 同源序列+目的基因特异性正向扩增引物序列(20-25bp)-3´ 设计引物时,可以参考以下实例(以 pUC19 线性化载体为例): 3.PCR 扩增插入片段 推荐使用高保真聚合酶进行 PCR 扩增插入片段,以减少扩增突变的产生,选择聚合酶时无需考虑末端有无 A 加尾 发生(重组过程中将会被去除,在最终载体中不会出现)。PCR 扩增结束后,对目的 PCR 产物进行纯化:若是扩增模 板与克隆载体抗性不同,且 PCR 产物条带电泳单一,产物可以无需纯化直接用于重组反应,或者对 PCR 产物进行脱盐 等简单纯化;否则,需要进行琼脂糖凝胶电泳回收特异性的目的 PCR 片段。 4.重组反应进行 取出 EasyFusion Assembly Master mix, 置于冰浴中,配制下图应体系(如果不慎将液体粘在管壁,可通过短暂离心沉降) 注意:10 ul 反应体系中,载体和各插入片段建议量在 20-50ng 之间,载体与各插入片段的最佳摩尔比为 1:2-1:3 轻轻混匀反应体系,50℃反应 15-30 分钟(对于多片段重组或大片段重组,建议反应时间 30 分钟,可延长反应时 间至 1 小时);待反应结束后,将离心管置于冰上冷却数秒,之后将重组产物保存于-20℃或用于转化。 5. 反应产物转化、涂板及克隆鉴定 建议所使用的感受态细胞效率要达到> 5X 107 cfu/ug。转化步骤按照不同菌种的要求进行或者按标准转化操作 进行即可。菌落长出之后,建议采用菌落 PCR 进行阳性克隆鉴定,或者对样品进行测序确保正确。 保存条件及组成成分 -20℃保存及冰袋运输 组成成分:2X EasyFusion Assembly Master Mix , 125ul; Linearized pUC19 Vector (10ng/ul),5ul;Control Insert(0.5kb, 20ng/ul),5ul 注意事项 1. 线性化载体或目的片段的纯化的品质及浓度等较差会显著降低克隆阳性率及克隆数。 2. 重组质粒大小的增加(>12kb),克隆效率会显著降低,选择稳定性更好的感受态及转化效率更高效的感受态细胞。 3. 菌落较少时,建议适当增加重组反应产物的体积量,或者提高转化产物量等。 4. 随着重组片段数目的增加,克隆效率降低,建议增加引物重叠序列长度或适当延长反应时间。
产品介绍 本试剂盒可以快速从细胞、细菌和动物组织中提取总RNA。本产品中裂解液(RLT Lysis Bufer)可以快速裂解细胞和灭活RNA酶,通过DNA清除/RNA吸附通用柱吸附技术,去除基因组DNA残留,同时在乙醇辅助结合条件下,高效地结合在吸附柱的硅胶膜上,再经过多次的洗涤离心后,去除细胞代谢物和蛋白质等杂质,获得纯净的总RNA。纯化的RNA可用于RT-PCR,NorthernBlotPoly(A)+筛选等多种实验。 产品亮点 安全性高:无需使用苯酚,氯仿等试剂,无需乙醇沉淀 使用范围广:对细胞、细菌、动物组织提取均适用 操作简单快速:全程室温操作,10-20分钟可完成纯化步骤 提取纯度高:经多次柱吸附和洗涤,基因组DNA和蛋白质污染低 首次使用前,在漂洗液 RWB Wash Buffer 中加入标签指定量的无水乙醇(5 preps/50 preps分别加入 4.8 ml/48 ml 无水乙醇),充分混匀后使用,并做好标记。 *注意观察各溶液是否有析出或浑浊(尤其冬季低温环境时),可 37℃温浴复溶至溶液澄清,避免影响使用效果。 运输和保存方式 常温运输,室温避光保存,有效期 12 个月。2-4°C 可保存更长时间
产品介绍 TRnaZol Reagent 适用于快速、直接从多种组织和细胞中提取总 RNA 的一种广谱型试剂。TRnaZol Reagent 内含优化的异硫氰酸胍、酸性酚等物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶,最大 限度地裂解样品且同时保证 RNA 的完整性。加入 RNA Extraction Buffer 离心后,溶液会分成三层:上 层无色水相、中间层和下层红色有机相,其中 RNA 分布在上清无色水相中。本试剂操作快速方便,颜 色分明,提取的总 RNA 完整性好,纯度高,无蛋白和 DNA 的污染,可用于各种分子生物学实验,如 RT-PCR、Real-time PCR、Dot Blot、Northern 等。 产品特色 ✔ 安全性高:使用 RNA Extraction Buffer 替代氯仿 ✔ 使用范围广:对人、动物、植物和细菌组织提取均适用 ✔ 颜色分明:溶液呈粉红色,便于分离水相和有机相 ✔ 提取纯度高:DNA 和蛋白质污染最低,可用于多种下游实验 产品介绍 TRnaZol Reagent 适用于快速、直接从多种组织和细胞中提取总 RNA 的一种广谱型试剂。TRnaZol Reagent 内含优化的异硫氰酸胍、酸性酚等物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶,最大 限度地裂解样品且同时保证 RNA 的完整性。加入 RNA Extraction Buffer 离心后,溶液会分成三层:上 层无色水相、中间层和下层红色有机相,其中 RNA 分布在上清无色水相中。本试剂操作快速方便,颜 色分明,提取的总 RNA 完整性好,纯度高,无蛋白和 DNA 的污染,可用于各种分子生物学实验,如 RT-PCR、Real-time PCR、Dot Blot、Northern 等。 产品特色 ✔ 安全性高:使用 RNA Extraction Buffer 替代氯仿 ✔ 使用范围广:对人、动物、植物和细菌组织提取均适用 ✔ 颜色分明:溶液呈粉红色,便于分离水相和有机相 ✔ 提取纯度高:DNA 和蛋白质污染最低,可用于多种下游实验 组成成分及保存条件
产品介绍 NCM Western Blot Stripping Buffer(蛋白印迹膜再生液/抗体剥离液)是新赛美生物生产的用于去除结合在印迹膜(PVDF膜或NC膜)上的一抗和二抗的洗涤液。该产品作用温和,不含有毒有味的巯基乙醇,在不影响目的蛋白的情况下,可使同一张印迹膜进行多次抗体检测。省去反复电泳和转膜等步骤,节省样品及时间,加快Western Blot检测实验。 产品特色 Ø 独有的配方,去除抗体效力强 Ø 对蛋白作用温和,不影响目的蛋白 Ø 不含有巯基乙醇,无毒无味,室温条件下使用保存 Ø 适用PVDF膜和NC膜,加速抗体检测 操作步骤 1. 将曝光结束的蛋白印迹膜充分浸入适当体积的NCM Western BlotStripping Buffer(蛋白印迹膜再生液/抗体剥离液)中,抗体剥离液要充分覆盖膜的表面,在脱色摇床上,室温中速震荡孵育10分钟,弃去剥离液。 2. (可选)重复步骤1。(对于信号正常或较弱的印迹膜也可以不必重复步骤1,如果是内参等表达量高的蛋白,可以重复步骤1三次,以保证彻底去除了抗体。) 3. 每用镊子取出印迹膜,加入洗涤缓冲液TBST或PBST,在脱色摇床上中速震荡洗涤3次,每次5分钟。 4. (可选)通过显色曝光等方法检测抗体是否去除,如检测到信号,需重复步骤1,确保抗体被除尽。 5. 对印迹膜重新进行封闭,进入下一轮Western Blot 实验。 保存条件 室温保存,运输,一年有效 注意事项 1. 建议先检查表达量低的蛋白,再用NCM Western Blot Stripping Buffer处理印迹膜后,检测表达量高的蛋白; 2. 本品适用于NC膜和PVDF膜,推荐使用PVDF膜,效果更佳; 3. 为了安全和健康,请穿实验服,戴手套操作
产品介绍 新赛美生物的磷酸酶抑制剂混合液(ProtLytic Phosphatase Inhibitor Cocktail)是经优化好的多种 磷酸酶抑制剂的混合物组成的,是一种广谱的抑制剂混合物,在抽提和纯化蛋白时能够 有效防止蛋白被内源性的磷酸酶降解。成分主要含有 sodium fluoride,sodium orthovanadate,Sodium Pyrophosphate,β-glycerophosphate,Imidazole 等多种抑制剂, 主要抑制酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、ATP 酶等,用于蛋白纯化,蛋白免疫印迹, 免疫共 沉淀,免疫荧光,免疫组织化学,激酶测定等研究。 操作步骤 将磷酸酶抑制剂混合液,根据实验体系的需求,按照 1:100 的比率将其加入到样品 溶液中(如组织抽提物或细胞裂解物)。 保存条件 4 ℃保存,冰袋运输,至少 1 年有效; 注意事项 1. 磷酸酶抑制剂会损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危 险 2. 不同样品中含有的磷酸酶量及种类不同,可根据具体实验调整加入磷酸酶抑制剂混合液 的量,如加入 2 倍,3 倍等量,才能有效抑制内源性磷酸酶的作用 3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴防护手套操作
产品介绍 新赛美生物的蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合液(Protease and PhosphataseInhibitor Cocktail) 是经优化好的多种蛋白酶和磷酸酶抑制剂的混合物组成的,仅用一种溶液即可方便地完 成在抽提和纯化蛋白时,能够有效防止蛋白被内源性的蛋白酶和磷酸酶的降解。成分含 有 Aprotinin,Bestatin,Leupetin,Pepstatin,PMSF,NaF,Sodium Orthovanadate,Sodium Pyrophosphate 等多种蛋白酶和磷酸酶家族的抑制剂,主要抑制氨基肽酶、半胱氨酸和 丝氨酸蛋白酶、丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸蛋白酶和磷酸酶、蛋白酪氨酸磷酸酶、碱性磷 酸酶、酸性磷酸酶等,用于蛋白纯化,蛋白免疫印迹, 免疫共沉淀,免疫荧光,免疫组 织化学,激酶测定等研究。 操作步骤 在室温下溶解含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合液,混匀之后,根据实验体系的需求, 按照 1:100 的比率将抑制剂混合液加入到样品溶液中(如组织抽提物或细胞裂解物)。 保存条件 -20 ℃保存,冰袋运输,至少 1 年有效; 注意事项 1. 蛋白酶和磷酸酶抑制剂严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收 后有致命危险; 2. 不同样品中含有的蛋白酶和磷酸酶的量及种类不同,可根据具体实验调整加入抑制剂混 合液的量,如加入 2 倍,3 倍等量,才能有效抑制内源性蛋白酶和磷酸酶的作用 3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴防护手套操作
产品介绍 RIPA 即 Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液。新赛美生物的 RIPA 裂解液裂解所得的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等。主要成分是:50mMTris(pH 7.6),150mM NaCl,1% NP-40,0.5% sodiumdeoxycholate,0.1% SDS 等多种裂解剂和抑制剂,能有效地抑制蛋白 降解。 操作步骤 对于培养细胞样品: 1. 取适当量的NCM RIPA Buffer 裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。 注意:NCM RIPA Buffer 不含蛋白酶等抑制剂,根据需要在使用前添加蛋白酶,磷酸酶等抑制剂。 2. a.对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有 干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使 裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。 b. 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。 对于组织样品: 1. 把组织剪切成细小的碎片。 2. 融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓 度为 1mM。 3. 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加 更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量) 4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。 5. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀 等操作。 6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品裂解 充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点 是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。 保存条件 4℃保存,室温运输,1 年有效; 注意事项: 1.RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因 组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清 用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明 胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如 NFκB、p53 等时,通 常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。 2.为获得最佳的实验效果,可适当分装使用,以尽量避免反复冻融。 3.PMSF 应现用现加,需自备 PMSF。 4.裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 5.蛋白酶抑制剂均有较高的毒性,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦 直接接触,请立即用流水冲洗,再向医疗保健结构咨询。
产品介绍 Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是MTT,XTT等的替代方法,一种基于WST-8(水溶性四唑盐,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分。WST-8在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的Formazan。对于同样的细胞,颜色的深浅(生成的Formazan量)和细胞数目呈线性关系。可用于药物筛选、细胞增殖和毒性测定、肿瘤药敏等试验。 操作步骤 一. 制作标准曲线(测定细胞具体数量) 1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞; 2.按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做4-7个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔; 3.接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加入CCK-8试剂(按每100 μL培养基加10μL CCK-8)培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标,OD值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。(使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致) 二. 细胞活性检测 1.在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔),将培养板放在培养箱中预培养一段时间; 2.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡,它们会影响OD值的读数); 3.将培养板置于培养箱内孵育1-4小时; 4.用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。 三.细胞增殖-毒性检测 1.在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔),将培养板放在培养箱中预培养24小时; 2.向培养板加入不同浓度的待测药物; 3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间; 4.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡); 5.将培养板置于培养箱内孵育1-4小时; 6.用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。 注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次, 然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。 四.活力计算 细胞存活率*(%)=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100% 抑制率*(%)=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100% As:实验孔吸光度(含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液); Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液,不含药物) ; Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液,不含细胞、药物) 。 保存条件 4℃避光保存,有效期12个月;-20℃避光保存,有效期24个月 实验应用 1. 细胞增殖测定:CCK-8是水溶性的,在培养基中稳定且无毒。 2. 细胞活性分析,包括细胞毒性:代谢活性以及染料的形成与细胞的活性和损伤成比例。 3. 细胞因子分析:测定细胞因子诱导的增殖,必要时,可在试验结束时回收和扩增细胞 注意事项 1.CCK-8的培养时间一般为1-4小时,但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察显色程度,根据细胞种类而定,需要摸索条件,CCK-8的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。 2.使用96孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问 题。一方面,由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的PBS,水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。 3.本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,所以还原剂 (例如一些抗氧化剂)会干扰检测,如果待检测体系中存在较多的还原剂,需设法去除。用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。 4.加入药物中如含有金属,对 CCK-8 显色有影响。终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%,15%,90% 的显色反应,使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话,将会100% 抑制。 5.培养基中的酚红不会影响实验结果,酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。 6.本产品可以检测革兰氏阴性细菌,但不能检测革兰氏阳性细菌和酵母细胞。向100μL培养液中加入10μL CCK-8溶液,并培养1-4小时或过夜。 7.CCK-8试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深,OD值不断增加(注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的)。 8.要测定细胞的具体数量,建议同时做标准曲线。 9.建议采用多通道移液器,以减小平行孔间的差异。 10.以下方法可以终止CCK-8反应(96 孔板):(a).在显色反应后,将培养板放置4°C冰箱内。(b).每孔加10μL 0.1M HCl溶液。(c).每孔加10μL 1% (w/v) 的SDS (十二烷基硫酸钠)溶液。注意:反应停止后,应在24小时内测定。 11. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。 12. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品介绍 Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是MTT,XTT等的替代方法,一种基于WST-8(水溶性四唑盐,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分。WST-8在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的Formazan。对于同样的细胞,颜色的深浅(生成的Formazan量)和细胞数目呈线性关系。可用于药物筛选、细胞增殖和毒性测定、肿瘤药敏等试验。 操作步骤 一. 制作标准曲线(测定细胞具体数量) 1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞; 2.按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做4-7个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔; 3.接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加入CCK-8试剂(按每100 μL培养基加10μL CCK-8)培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标,OD值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。(使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致) 二. 细胞活性检测 1.在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔),将培养板放在培养箱中预培养一段时间; 2.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡,它们会影响OD值的读数); 3.将培养板置于培养箱内孵育1-4小时; 4.用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。 三.细胞增殖-毒性检测 1.在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔),将培养板放在培养箱中预培养24小时; 2.向培养板加入不同浓度的待测药物; 3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间; 4.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡); 5.将培养板置于培养箱内孵育1-4小时; 6.用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。 注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次, 然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。 四.活力计算 细胞存活率*(%)=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100% 抑制率*(%)=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100% As:实验孔吸光度(含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液); Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液,不含药物) ; Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液,不含细胞、药物) 。 保存条件 4℃避光保存,有效期12个月;-20℃避光保存,有效期24个月 实验应用 1. 细胞增殖测定:CCK-8是水溶性的,在培养基中稳定且无毒。 2. 细胞活性分析,包括细胞毒性:代谢活性以及染料的形成与细胞的活性和损伤成比例。 3. 细胞因子分析:测定细胞因子诱导的增殖,必要时,可在试验结束时回收和扩增细胞 注意事项 1.CCK-8的培养时间一般为1-4小时,但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察显色程度,根据细胞种类而定,需要摸索条件,CCK-8的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。 2.使用96孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问 题。一方面,由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的PBS,水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。 3.本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,所以还原剂 (例如一些抗氧化剂)会干扰检测,如果待检测体系中存在较多的还原剂,需设法去除。用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。 4.加入药物中如含有金属,对 CCK-8 显色有影响。终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%,15%,90% 的显色反应,使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话,将会100% 抑制。 5.培养基中的酚红不会影响实验结果,酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。 6.本产品可以检测革兰氏阴性细菌,但不能检测革兰氏阳性细菌和酵母细胞。向100μL培养液中加入10μL CCK-8溶液,并培养1-4小时或过夜。 7.CCK-8试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深,OD值不断增加(注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的)。 8.要测定细胞的具体数量,建议同时做标准曲线。 9.建议采用多通道移液器,以减小平行孔间的差异。 10.以下方法可以终止CCK-8反应(96 孔板):(a).在显色反应后,将培养板放置4°C冰箱内。(b).每孔加10μL 0.1M HCl溶液。(c).每孔加10μL 1% (w/v) 的SDS (十二烷基硫酸钠)溶液。注意:反应停止后,应在24小时内测定。 11. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。 12. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品介绍 WaterBathCleaner(水浴锅抑菌剂)是一种即用型的,专门用于清除和抑制水浴锅中细 菌、真菌、支原体等微生物清除的一款产品。本品主要成分是一种阳离子表面活性剂, 系广谱杀菌剂,能改变细菌胞浆膜通透性,使菌体胞浆物质外渗,阻碍其代谢而起杀灭 作用。能够有效清除细胞培养的各类细菌、真菌、支原体等微生物,尤其对水中的细菌、 真菌及其芽孢和孢子抑制可长达 7天。 产品特色 安全性:使用浓度下对皮肤和组织无刺激性,无任何不良反应 高效广谱杀菌剂,对细菌、真菌、支原体等杀力强 对金属、橡胶制品无腐蚀作用 安全长效,抑制效果长达 7天 操作步骤 1.本品水浴锅抑菌剂以 1000倍的浓缩液形式提供,初次使用建议先清洁水浴锅, 2.然后直接按照 1:1000的比例向水浴锅中加入本品 保存条件 室温保存运输,至少 1年有效; 注意事项 1.本品仅供科研使用,勿做其他用途 2.使用本试剂前请仔细阅读说明书 3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
产品简介Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚) 是一种非离子型表面活性剂(或称去污剂)。分子量为646.86(C34H62O11)。它能溶解脂质,以增加细胞膜对抗体的通透性。免疫细胞化学中Triton X-100常用浓度为1%和0.3%,其中1%的Triton X-100常用于漂洗组织标本,0.3%的Triton X-100则常用于稀释血清,0.1%的Triton X-100常用于LAMP(环介导等温扩增),配制BSA等。通常是先配制成30%的Triton X-100储备液,临用时稀释至所需浓度。产品组成 产品编号产品名称10 mL50 mL100 mLStorageE-IR-R122Triton X-10010 mL50 mL100 mLRT使用说明本品为Triton X-100溶液,建议先配制成30%的Triton X-100储备液,临用时稀释至所需浓度。30%的Triton X-100储备液的制备:取3 mL的Triton X-100,加入到7 mL的1x PBS buffer中,即为30%的Triton X-100。临用前,用1x PBS buffer稀释成需要的浓度即可。保存条件室温保存,有效期12个月。注意事项1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
LB固体培养基(干粉)产品简介英文名称LB agar, powder别名lb培养基储存条件2-8℃,有效期2年规格1L 10*1L单位瓶组成成分: 胰蛋白胨10g,酵母提取物 5g ,NaCl 10g,琼脂粉15g。使用时加入1000ml水,高压灭菌。使用方法:将本品全部加入蒸馏水中,定容至1L,搅拌使其充分溶解,调节PH值到7.2左右(一般此步可省去,不用调节)。可分装,121℃高压灭菌15min,倒平板。若需倒制含抗生素的平板,灭菌后培养基冷至不烫手时再加入抗生素,摇匀倒板。倒好的含抗生素的平板4℃保存,2周内用完。