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NCM/新赛美 RIPA裂解液

产品细节图:

  • NCM/新赛美 RIPA裂解液

NCM/新赛美 RIPA裂解液

品牌:NCM/新赛美 | 货号:WB3100
  • 所属大类 : 试剂
  • 所属小类 : 常用生化试剂
  • 品牌 : NCM/新赛美
  • 规格 : 100ml
  • 原价 : ¥199.00
  • 促销价 : ¥199.00
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    产品介绍 

    RIPA 即 Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液。新赛美生物的 RIPA 裂解液裂解所得的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等。主要成分是:50mMTris(pH 7.6),150mM  NaCl,1% NP-40,0.5% sodiumdeoxycholate,0.1% SDS 等多种裂解剂和抑制剂,能有效地抑制蛋白 降解。 

    操作步骤 

    对于培养细胞样品: 

    1. 取适当量的NCM RIPA Buffer 裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。 

    注意:NCM RIPA Buffer 不含蛋白酶等抑制剂,根据需要在使用前添加蛋白酶,磷酸酶等抑制剂。 2. a.对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有 干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使 裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。 b. 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。 

    对于组织样品:

    1. 把组织剪切成细小的碎片。 2. 融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓 度为 1mM。 3. 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加 更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)  4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。 5. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀 等操作。 6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品裂解 充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点 是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

    保存条件 

    4℃保存,室温运输,1 年有效;

    注意事项:

    1.RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因 组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清 用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明 胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如 NFκB、p53 等时,通 常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。 2.为获得最佳的实验效果,可适当分装使用,以尽量避免反复冻融。 3.PMSF 应现用现加,需自备 PMSF。  4.裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 5.蛋白酶抑制剂均有较高的毒性,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦 直接接触,请立即用流水冲洗,再向医疗保健结构咨询。

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