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多糖多酚植物总RNA提取试剂盒

产品细节图:

  • 多糖多酚植物总RNA提取试剂盒

多糖多酚植物总RNA提取试剂盒

品牌:genefist | 货号:GF441
  • 所属大类 : 试剂
  • 所属小类 : 常用生化试剂
  • 品牌 : genefist
  • 规格 : 50次
  • 原价 : ¥1184.00
  • 促销价 : ¥1184.00
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    储存条件
    “裂解液RS” 和 “DNase I”,储存于-20℃;其他试剂室温(15-25℃)保存。
    产品简介
    本试剂盒所含“裂解液 RS”,采用我司独特的“SDS/抗氧化”的方式,可适用于广泛的植物组织,包含草本植物与本本植物的叶片、具高粘性的多糖多酚类及种子胚乳的植物样本;此提取方案,增加了额外步骤去除多酚和多糖,RNA 的提取总量更高。提取的总 RNA 纯度高,基本没有基因组、蛋白和其它杂质的污染,可用于 PCR、Blot、分子克隆等多种下游实验。
    预防RNase污染,应注意以下几方面
    1.经常更换新手套,因为皮肤带有细菌,可能导致RNase污染;使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
    2.RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min,然后用水清洗再灭菌,即可去除RNase。
    3.配制溶液应使用无RNase的水(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%(V/V),高压灭菌)。
    使用前注意事项
    1.裂解液 RS:使用前请于 50℃水浴将裂解液完全回溶,并添加 450ul 巯基乙醇;添加过巯基乙醇的裂解液 RS 继续保存于-20℃(建议将添加过巯基乙醇的裂解液 RS 于无酶管分装成小量,再保存于-20℃)。
    2.溶液 BC:使用前请添加 30ml 无水乙醇。
    3.漂洗液 PW:使用前请添加 64ml 无水乙醇。
    4.为确保 RNA 的品质及产量,应尽量收取新鲜的动物组织进行 RNA 提取,或将组织立即以液氮冷冻,储存于-70℃,组织亦可保存在 RANstore 样本保存液(目录号:TR38)中。
    5.凤梨和兰花推荐采用“裂解液 RL”(kit 产品目录 TR02)
    操作步骤
    1.匀浆处理:50-100 mg 植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末,加入 450 μl 裂解液 RS(使用前请先检查是否已加入 β-巯基乙醇),立即涡旋剧烈震荡混匀,并于 56℃孵育 5-10 分钟,每隔一段时间可翻转混合离心管。
    注意:由于植物多样性非常丰富,而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的 RNA 含量都不相同,请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。
    2.加入 150ul 的溶液 GP 至裂解液中,混合均匀,于冰上孵育 5 分钟,12,000rpm(~13,400×g)离心 5 min。
    注意:溶液会呈现雾状,为界面活性剂、蛋白质、多糖及二次代谢物的沉淀物。
    3.移取上清液至过滤柱 CS1 上(过滤柱 CS1 放在收集管中),12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min。
    4.小心吸取收集管中的上清至新的 RNase-Free 离心管中,吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
    5.向溶液中加入 1.5 倍体积的溶液 BC(已添加无水乙醇),以震荡或移液器吸吐混合均匀。
    注意:加入溶液 BC 后会形成丝状沉淀物,不影响 RNA 提取。
    6.移取混合液(连同沉淀物一起)至吸附柱 CR1(吸附柱 CR1 放在收集管中),12,000 rpm(~13,400×g) 离心1 min,丢弃滤液,将吸附柱 CR1 放回收集管中。
    注意:如果混合液体积大于吸附柱容量,可以分次完成。
    7.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW,12,000rpm(~13,400×g)离心 1min,丢弃滤液,将吸附柱 CR1 放回收集管中。
    8.DNase Ⅰ降解。
    每一纯化反应,请将 80 ul DNase 消化液与 10ul DNaseⅠ预先混合在新的离心管(轻弹或翻转离心管以混合均匀,请勿震荡),将 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心,于室温(25~28℃)孵育 15 分钟。
    注意:如同时操作多组样本,请使用前现配新鲜的 DNaseⅠ工作液,请勿预先配制保存 DNaseⅠ工作液。
    9.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW,12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CR1 放回收集管中。
    10.向吸附柱 CR1 中加入 600 μl 漂洗液 PW(使用前请先检查是否已加入乙醇),12,000 rpm(~13,400×g) 离心 1 min,丢弃滤液,将吸附柱 CR1 放回收集管中。
    11.重复操作步骤 10。
    12.12,000rpm(~13,400×g)离心 3 min,将吸附柱 CR1 置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附柱中残余的乙醇。
    注意:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,离心后将吸附柱 CR1 在室温放置片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续的 RT 等实验。
    13.将吸附柱 CR1 转入一个新的 RNase-Free 离心管中,加入 30-100 μl 无酶双蒸水至吸附柱的膜中心,室温静置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 1 min,得到 RNA 溶液。
    注意:洗脱液体积不应少于 30μl,体积过小影响回收效率。为了增加产量,可将步骤 13 得到的 RNA 溶液再加入吸附柱 CR1,放置2min,12,000rpm(~13,400×g)离心 1min,得到 RNA 溶液。RNA 溶液-70℃中保存。

    附录:从高度黏稠性的富含多酚及多糖成分的样本中提取 RNA
    樟科植物样本,在裂解后粘稠度高、移取困难,可直接于过滤柱中进行裂解,以减少移液器吸取的步骤。
    1.将过滤柱 CS1 于冰上预冷,秤取不超过 30mg 的样本组织,于液氮中迅速研磨,并将研磨的样本直接转移至预冷的过滤柱 CS1 里(过滤柱 CS1 放在收集管中)。
    2.加入 600ul 裂解液 RS(已添加巯基乙醇)至过滤柱,于 60℃金属浴孵育 10 分钟。
    3.12,000 rpm(~13,400×g)离心 5 min,将收集管中的滤液移取至新的 1.5ml 离心管,请避免吸取到沉淀物。
    注意:有些样本可能会堵塞过滤柱,可再次离心,或将管柱中剩余的裂解液移至新的过滤柱 CS1 再次离心。
    4.加入 1/3 倍体积的溶液 GP 至滤液中,混合均匀,于冰上孵育 5 分钟,12,000 rpm(~13,400×g)离心离心 5min,将上清液小心转移至新的 1.5ml 离心管,不要触碰或移取固体沉淀。转至上面“操作步骤 5”。

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    1.《Multifunction Sr, Co and F co-doped microporous coating on titanium of antibacterial, angiogenic and osteogenic activities》
    作者:Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影响因子:4.259
    期刊:《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID:27353337

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