血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒

选配试剂
红细胞裂解液（Red Cell Lysis Buffer 货号：GF1201-01）;RNase A (100mg/ml) 货号：GF0201-01)

   储存条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存18个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保   存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预  热10 min，以溶解沉淀。
   产品简介及特点
本试剂盒采用可以特异性结合DNA   的离心吸附柱，和独特的缓冲液系统，能高效、专一吸附DNA，可有 效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,用来提取多种细胞中的基因组 DNA。不需要苯酚、氯仿等有机溶剂，安全方便；提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，质量稳定可靠。根据不同的样本量和样本类型，可以提取的DNA 产量范围为 1-40ug。 
使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。 
注意事项 
1. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量也下降。
2. 若溶液 GA 或溶液BG 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。 
3. 所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。
操作步骤 
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。1.处理材料
a. 如提取材料为血液，可直接使用 200μl 新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足 200 μl 可加溶液GA 补足；
注意：如需处理更大体积血液，如 300μl-1 ml，应按以下步骤操作：在样品中加入 3 倍体积红细胞裂解液 （例如，300μl 血液加入 900μl 红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置 5 min，期间再颠倒混匀几次。10000 rpm(~11,500×g)离心 1 min（若离心机最高转速不允许，可 3000 rpm(~3,400×g)离心5 min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加 200 μl 溶液 GA，振荡至彻底混匀。 
红细胞裂解液本公司另外有售（货号：GF1201-01），可根据需要来决定购买。 
b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量 5- 20μl，可加溶液 GA 补足 200 μl 后进行下面的裂解步骤。
c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后 10,000 rpm(~11,200×g)离心 1 min，倒尽上清，加 200 μl 溶液GA，振荡至彻底悬浮。
d. 动物组织（脾组织用量应少 10 mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后 10,000rpm(~11,200×g)离心 1 min，倒尽上清，加 200 μl 缓冲液 GA，振荡至彻底悬浮。
注意：如果需要去除RNA，可加入 4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：GF0201-01）， 振荡 15 sec，室温放置 5 min。
2. 加入 20μl Proteinase K 溶液，混匀。
 a.提取血液基因组时，加入Proteinase K，混匀，即可继续进行下一步。
 b.提取细胞基因组时，加入Proteinase K，混匀，即可继续进行下一步。
 c.提取组织基因组时，加入 Proteinase K 混匀后，在 56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。
注意：不同组织裂解时间不同，通常需 1-3 h 即可完成（鼠尾需要消化过夜），每小时颠倒混合样品 2-3次，用水浴振荡器也可。
3. 加入 200ul 溶液 BG，充分颠倒混匀，70℃放置 10 min,溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入溶液 BG 时可能会产生白色沉淀，一般 70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取 DNA 量少和提取出的DNA 不纯。当血液体积≤200μl 且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。
4. 加入 200ul 无水乙醇，充分振荡混匀 15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CG1 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱CG1 放回收集管中。 
6. 向吸附柱CG1 中加入 300μl 溶液BG，12,000rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CG1 放入收集管中。

注意：这一步骤对于清除内切酶是必不可少的，以防止污染。
7. 向吸附柱CG1 中加入700μl 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱CG1 放入收集管中。 
8. 重复操作步骤 7。
9. 将吸附柱CG1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CG1 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、 PCR 等）实验。
10. 将吸附柱 CG1 转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200μl 洗脱缓冲液TB，室温放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min，将溶液收集到离心管中。
注意：洗脱液体积不应少于 50μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室温放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 min。