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血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒

产品细节图:

  • 血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒

血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒

品牌:genefist | 货号:GF304-02
  • 所属大类 : 试剂
  • 所属小类 : 常用生化试剂
  • 品牌 : genefist
  • 规格 : 50次
  • 原价 : ¥273.00
  • 促销价 : ¥273.00
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    血液/细胞/组织基因组 DNA 纯化试剂盒

    产品组成

    GF304-02

    GF304-03

    (50 preps)

    (200 preps)

    溶液 GA (Buffer GA)

    15 ml

    60 ml

    溶液 BG (Buffer BG)

    30ml

    120ml

    蛋白酶 K (20mg/ml)

    1.1ml

    4*1.1ml

    漂洗液 PW (Buffer PW)

    16ml(使用前请先加入

    64ml 无水乙醇)

    64ml(使用前请先加入

    256ml 无水乙醇)

    洗脱缓冲液 TB (Buffer TB)

    15 ml

    60 ml

    吸附柱 CG1 (Spin Columns CG1)

    50 个

    200 个

    收集管(2 ml) (Collection Tubes 2ml)

    50 个

    200 个


    选配试剂
    红细胞裂解液(Red Cell Lysis Buffer 货号:GF1201-01);RNase A (100mg/ml) 货号:GF0201-01)

       储存条件
    该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保   存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预  热10 min,以溶解沉淀。
       产品简介及特点
    本试剂盒采用可以特异性结合DNA   的离心吸附柱,和独特的缓冲液系统,能高效、专一吸附DNA,可有 效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,用来提取多种细胞中的基因组 DNA。不需要苯酚、氯仿等有机溶剂,安全方便;提取的基因组 DNA 片段大,纯度高,质量稳定可靠。根据不同的样本量和样本类型,可以提取的DNA 产量范围为 1-40ug。 
    使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。 
    注意事项 
    1. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量也下降。
    2. 若溶液 GA 或溶液BG 中有沉淀,可在 37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。 
    3. 所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。
    操作步骤 
    使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.处理材料
    a. 如提取材料为血液,可直接使用 200μl 新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液,不足 200 μl 可加溶液GA 补足;
    注意:如需处理更大体积血液,如 300μl-1 ml,应按以下步骤操作:在样品中加入 3 倍体积红细胞裂解液 (例如,300μl 血液加入 900μl 红细胞裂解液),颠倒混匀,室温放置 5 min,期间再颠倒混匀几次。10000 rpm(~11,500×g)离心 1 min(若离心机最高转速不允许,可 3000 rpm(~3,400×g)离心5 min),吸去上清,留下白细胞沉淀,加 200 μl 溶液 GA,振荡至彻底混匀。 
    红细胞裂解液本公司另外有售(货号:GF1201-01),可根据需要来决定购买。 
    b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量 5- 20μl,可加溶液 GA 补足 200 μl 后进行下面的裂解步骤。
    c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液,然后 10,000 rpm(~11,200×g)离心 1 min,倒尽上清,加 200 μl 溶液GA,振荡至彻底悬浮。
    d. 动物组织(脾组织用量应少 10 mg)应先打碎处理为细胞悬液,然后 10,000rpm(~11,200×g)离心 1 min,倒尽上清,加 200 μl 缓冲液 GA,振荡至彻底悬浮。
    注意:如果需要去除RNA,可加入 4 μl RNaseA(100 mg/ml)溶液(客户自备,目录号:GF0201-01), 振荡 15 sec,室温放置 5 min。
    2. 加入 20μl Proteinase K 溶液,混匀。
     a.提取血液基因组时,加入Proteinase K,混匀,即可继续进行下一步。
     b.提取细胞基因组时,加入Proteinase K,混匀,即可继续进行下一步。
     c.提取组织基因组时,加入 Proteinase K 混匀后,在 56℃放置,直至组织溶解,简短离心以去除管盖内壁的水珠,再进行下一步骤。
    注意:不同组织裂解时间不同,通常需 1-3 h 即可完成(鼠尾需要消化过夜),每小时颠倒混合样品 2-3次,用水浴振荡器也可。
    3. 加入 200ul 溶液 BG,充分颠倒混匀,70℃放置 10 min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意:加入溶液 BG 时可能会产生白色沉淀,一般 70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取 DNA 量少和提取出的DNA 不纯。当血液体积≤200μl 且没有采用红细胞裂解处理,或是样本储存条件不佳,水浴后颜色可能为深褐色,注意溶液中没有团块等沉淀。
    4. 加入 200ul 无水乙醇,充分振荡混匀 15sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。 
    5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CG1 中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱CG1 放回收集管中。 
    6. 向吸附柱CG1 中加入 300μl 溶液BG,12,000rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱 CG1 放入收集管中。

    注意:这一步骤对于清除内切酶是必不可少的,以防止污染。
    7. 向吸附柱CG1 中加入700μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec,倒掉废液,将吸附柱CG1 放入收集管中。 
    8. 重复操作步骤 7。
    9. 将吸附柱CG1 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,倒掉废液。将吸附柱 CG1 置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
    注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR 等)实验。
    10. 将吸附柱 CG1 转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200μl 洗脱缓冲液TB,室温放置 2-5 min,12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min,将溶液收集到离心管中。
    注意:洗脱液体积不应少于 50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。为增加基因组 DNA 的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 min。 

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