Hoechst33342染色液(1mg/ml)

Hoechst33342 Stain Solution(1mg/ml)

【保存条件】 

-20℃避光保存，有效期 1 年。 

【概述】 

Hoechst 33342，也称 bisBenzimide H 33342 或 HOE 33342。分子式为 C27H28N6O·3HCl·3H2O，分子量为 615.99，CAS Number 23491-52-3。 Hoechst 33342 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342 染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342 也常用于普通的细胞核染色，或常规的 DNA 染色。 Hoechst 33342 的最大激发波长为 346nm，最大发射波长为 460nm；Hoechst 33342 和双 链 DNA 结合后，最大激发波长为 350nm，最大发射波长为 461nm。 本 Hoechst 33342 染色液浓度为 1mg/ml，可稀释后用于固定细胞或组织的细胞核染色， 也可稀释后用于活细胞或组织的细胞核染色。 

【使用方法】 

使用前用生理盐水或 PBS 将 Hoechst 33342 染色液稀释 100 倍，即为工作液。

 A 对于固定的细胞或组织： 

1. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色， 则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33342 染色。如果不需要进 行其它染色，则直接进行后续的 Hoechst 33342 染色。 

2. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33342 工作液，覆盖住样品即可；对于悬浮 细胞，至少加入待染色样品 3 倍体积的工作液，混匀。室温放置 3-5 分钟。 

3. 吸除 Hoechst 33342 染色液，用 TBST、PBS 或生理盐水洗涤 2-3 次，每次 3-5 分钟。 

4. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细 胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。 

B 对于活细胞或组织： 

1. 加入适当量 Hoechst 33342 工作液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个 孔需加入 1mL 工作液，对于 96 孔板一个孔需加入 100μL 工作液。 

2. 在适宜于细胞培养的温度下培养 20-30 分钟。弃染色液，用 PBS 或培养液洗涤 2-3 次即可进行荧光检测。 

【效果图】 

本产品用于活细胞染色效果参考图：

图 1.正常培养的 HeLa 细胞用本产品染色后的实拍效果图。图 A 为正常细胞 Hoehst 33342 的染色效果图。图 B 中除 了正常细胞外，还清晰可见呈现致密浓染的凋亡细胞。

【注意事项】 

1. Hoechst 33342 对人体有害，请注意适当防护。 

2. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。 

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

4. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。