5XSDS-PAGE双色蛋白Loading buffer（DTT）

【保存条件】

 建议分装冻存，避免反复冻融，-20℃避光保存，有效期 1 年 

【概述】

 5×SDS-PAGE 双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解，并在 SDS-PAGE 运行期间防止 pH 值变化。一些蛋白质对在 Tris 缓冲液中电泳期间温度波动引起 的 pH 变化敏感，优化后的上样缓冲液组分可防止在 SDS-PAGE 电泳之前的样品加热过程中 以及电泳过程中蛋白质降解。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电 荷，这时蛋白质本身的电荷完全被 SDS 掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS 还 可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT 可以断开半胱 氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构 上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。 上样缓冲液包含两种跟踪染料：蓝色（溴酚蓝），用于跟踪电泳的进度；粉红色（pyronin Y），用于在 Western 印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 

【使用建议】

 1. 室温或 37℃水浴解冻 5×SDS-PAGE 双色蛋白上样缓冲液，并摇晃混匀。 2. 请按每 40μl 蛋白样品加入 10μl 上样缓冲液的比例(5 倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度 过高，可用双蒸水稀释。 3. 混匀后，100℃水浴加热 5-10 分钟，使蛋白变性。 4. 冷却至室温后，10000-14000rpm 离心 2-5 分钟，取上清直接上样电泳即可

【注意事项】 

1. DTT 对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 该产品于-20℃保存时会出现 SDS 沉淀，使用前请确保溶液完全复溶混匀，有必要时可 置于 37℃水浴促溶。 3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂，PH 值受保存温度影响，在低温冻存状态 下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为 8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在 30kd 左右， 胶浓度为 12% 时，约在 20kd 左右，胶浓度为 15%时，大概在 10kd。请根据自己目标条带来判断结果 电泳时间。 5. 一般而言，吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的 SDS 聚丙烯酰胺凝胶（例如 15%）中，吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。