SDS细胞裂解液-500ml

SDS lysis buffer

【保存条件】 

4℃保存，有效期 1 年。 

【概述】 

SDS 裂解液是一种较为强烈的细胞组织裂解液，可用于动物、植物的细胞或组织样品， 也可以用于真菌或细菌样品。SDS 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGE、 Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。 

【使用建议】 

1.对于培养细胞样品： 

a.取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。 

b.对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋 白没有干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞 1-2 秒后，细胞就会被裂解。 植物细胞宜在冰上裂解 2-10min。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 分钟。 

对于悬浮细胞：

离心收集细胞，轻轻涡旋或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照 6 孔板每 孔细胞加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 分钟。 

对于细菌或酵母：

对于 1ml 菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用 PBS 洗涤一 次，充分去除液体后，轻轻涡旋或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入 100-200μl 裂 解液，轻轻涡旋或者弹击管底以混匀，冰上裂解 2-10min。如果希望获得更好的裂解效果， 细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液进行裂解。 

裂解液用量说明：

通常6孔板每孔细胞或者1ml的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200μl 或 250μl。每 100 万动物细胞用 100μl 本产品裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为 2-4mg/ml，不同细胞所不同。 c.充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。

2.对于组织样品： 

a.把组织剪切成细小的碎片。 

b.融解 SDS 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的 最终浓度为 1mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。 

c.按照每 20mg 组织加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添 加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) 

d.用玻璃匀浆器匀浆，或使用组织研磨仪研磨，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液 氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂 解 10 分钟。 

e.充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。每 20mg 冻存的小鼠肝脏组织用 200μl 本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓 度约为 15-25mg/ml，不同状态的不同组织有所不同。 

f.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使样品 裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀 浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。

【注意事项】 

1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

2. 本产品长时间低温存放可能会出现沉淀，可在 37ºC 水浴约 10 分钟以充分溶解沉淀。沉 淀完全溶解混匀后即可正常使用。 

3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 

4. 该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。