【保存条件】
建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃,有效期 1 年
【概述】
2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲液 (含 DTT)用于 Tricine-SDS-PAGE 电泳时作蛋白质上样用。其主要成份为 SDS,DTT,考马斯亮蓝,缓冲盐溶液等。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被 SDS 掩盖,消除 了各种蛋白质本身电荷的差异,SDS 还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子 的二级和三级结构,DTT 可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了 蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子 量大小有关。考马斯亮蓝作为指示剂,用于追踪电泳进度。
【使用建议】
1. 室温解冻 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲液。
2. 请按每 10μl 蛋白样品加入 10μl 上样缓冲液的比例(两倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度 过高,可用双蒸水稀释。
3. 混匀后,100℃水浴加热 5-10 分钟,使蛋白变性。
4. 冷却至室温后,10000-14000rpm 离心 2-5 分钟,取上清直接上样电泳即可。
【注意事项】
1. DTT 对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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