细菌基因组DNA提取试剂盒50T

操作步骤：
1. 取200μl细菌菌液（最多不超过1×109cells）于无酶1.5ml离心管中。
2. 10000×g离心1min或3000×g离心5min收集细菌沉淀。
3. 加入200μl无菌PBS将细菌重悬。
注意：为尽可能减少LB等细菌培养基对提取过程中的影响，可重复步骤2-3一次。
4. 加入30μlLysozyme Solution至溶液中，充分涡旋混匀15-20s后37℃孵育15-30min。
5. （可选）加入5μl RNaseASolution(20mg/ml，自备）至消化液中，颠倒混匀，室温或37℃放置5-10min。
6. 将所得溶液加入200μl Buffer BB并充分混匀，加入20μl ProteinaseK Solution后立即混匀，彻底混匀后置于70℃水浴中孵育10min。
7. 将溶液从水浴中取出，并加入100μl异丙醇充分混匀。
8. 于13000×g离心5min，离心结束后取上清溶液加入核酸吸附柱（提前套在2ml收集管中）。
9. 以8000×g离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
10. 向吸附柱中加入500μl Buffer IRB，8000×g离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
11. 向吸附柱中加入500μl Buffer WB（已加入无水乙醇），8000×g离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
12. 重复操作步骤11一次。
13. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中，最大转速 (~13,400×g)离心2min以除尽Buffer WB。将吸附柱套入新的1.5ml无酶离心管中并置于室温放置5-10min彻底晾干乙醇。
注意：Buffer WB中的乙醇残留会影响后续的酶反应实验。
14. 向吸附柱膜中间位置悬空滴加50-100μl BufferEB，室温静置2min后，最大转速(~13,400×g)离心2min收集核酸溶液。丢弃柱子，盖上EP管盖子置于-20℃保存。
注意：洗脱体积不应小于30μl，体积过少会影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。为了提高DNA的回收量，可将BufferEB加热（约60℃）并洗脱两次，可增加约15-20%得率。