Vipack 病毒包装转染试剂

【操作方法】

1. 对于贴壁细胞（以下均以6孔板为例，其它培养皿或培养板请根据相应面积换算）：

a.将细胞培养于培养皿或培养板内，通常在铺板后1-2天内长到70-90%。

b. 在转染前1-2小时，吸去细胞培养液，更换为新鲜的不含抗生素的完全培养液2ml。

c. 取2-4μg待转染的质粒DNA (质粒总体积不宜超过20μl，若有多种质粒请混匀)，以质量体积比1：3加入转染试剂6~12μl（如2μg待转染的质粒DNA加入转染试剂6μl）。

d.混匀后，室温孵育3-5分钟。

e. 把DNA-转染试剂混合物中加入500μl opti-MEM（若无opti-MEM可使用无血清无双抗的DMEM或1640，具体根据转染细胞使用的培养基）,充分混匀后静置10-15分钟。

f.后均匀滴加到整个6孔板内（加入前吸出原培养板中500μl培养基），并置于含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。

g. 在转染后4-6小时左右换液，更换为2ml新鲜的完全培养液，继续培养。

h.通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。

2. 对于悬浮细胞：

a. 离心收集悬浮细胞，用PBS洗涤一次。

b. 按照上面的步骤c)、d)、e）制备DNA-转染试剂-optiMEM混合物。

c. 每106个细胞的沉淀，用500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物重新悬浮，室温放置15-20分钟。

d. 在一个6孔板孔内加入1.5ml完全培养液，然后加入来自上一步的细胞-500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物，混匀。

e. 在含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。

f. 根据实验要求和转染试剂对于不同细胞的毒性不同，在4-6小时后离心收集细胞，用PBS洗一次，然后用2毫升完全培养 液重新悬浮细胞，继续培养。

g. 通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。