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质粒小提中量试剂盒

产品细节图:

  • 质粒小提中量试剂盒

质粒小提中量试剂盒

品牌:genefist | 货号:GF106
  • 所属大类 : 试剂
  • 所属小类 : 常用生化试剂
  • 品牌 : genefist
  • 规格 : 50次
  • 原价 : ¥240.00
  • 促销价 : ¥240.00
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    储存条件
    该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。

    产品简介
    本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,高效、专一吸附DNA,可去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。以下操作步骤适用于提取5-15 ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

    注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
    1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。
    2.使用前先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。
    3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。
    4.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm (~13,400×g )。
    5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10 kb 的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加 P1、P2、P3 的用量,洗脱缓冲液应在 65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间,以增加提取效率。

    操作步骤
    使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
    1.取5-15 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,尽量吸除上清。
    注意:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。收集的菌体量以能够充分裂解为佳,菌体过多裂解不充分会降低质粒的提取效率。
    2.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
    注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。
    3.向离心管中加入500 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
    注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5min,以免质粒受到破坏。如果菌液没有变清亮,可能是由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。
    4.向离心管中加入500 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min,此时在离心管底部形成沉淀。
    注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。
    5.将上一步收集的上清液分次加入吸附柱CP2中(吸附柱放入收集管中,其容量为750-800ul),注意尽量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。
    6.向吸附柱CP2中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。
    7.重复操作步骤6。
    8.吸附柱CP2放入收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
    注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP2开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
    9.将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2-5 min,12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。

    注意:洗脱缓冲液体积不应少于100μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2min,将质粒溶液收集到离心管中。 

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    期刊:《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID:27353337

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