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产品细节图:
储存条件
该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中，混匀后置于2-8℃保存，可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。
产品简介
本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料，高效、专一吸附DNA，可去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。以下操作步骤适用于提取5-15 ml过夜培养的大肠杆菌，质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。
注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A（将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入），混匀，置于 2-8℃保存。
2.使用前先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊，如有混浊现象，可在 37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3，使用后应立即盖紧盖子。
4.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心，速度为 12,000 rpm (~13,400×g )。
5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10 kb 的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加 P1、P2、P3 的用量，洗脱缓冲液应在 65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间，以增加提取效率。
操作步骤
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1.取5-15 ml过夜培养的菌液加入离心管中，12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min，尽量吸除上清。
注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。收集的菌体量以能够充分裂解为佳，菌体过多裂解不充分会降低质粒的提取效率。
2.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μl溶液P1（请先检查是否已加入RNase A），使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3.向离心管中加入500 μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒受到破坏。如果菌液没有变清亮，可能是由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
4.向离心管中加入500 μl溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min，此时在离心管底部形成沉淀。
注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
5.将上一步收集的上清液分次加入吸附柱CP2中(吸附柱放入收集管中，其容量为750-800ul)，注意尽量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP2放入收集管中。
6.向吸附柱CP2中加入700 μl漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP2放入收集管中。
7.重复操作步骤6。
8.吸附柱CP2放入收集管中，12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP2开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
9.将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300 μl洗脱缓冲液TB，室温放置2-5 min，12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min，将质粒溶液收集到离心管中。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于100μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响，若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了增加质粒的回收率，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，室温放置2 min，12,000 rpm(~13,400×g) 离心2min，将质粒溶液收集到离心管中。
暂时没有说明书
1.《Multifunction Sr, Co and F co-doped microporous coating on titanium of antibacterial, angiogenic and osteogenic activities》
作者：Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影响因子：4.259
期刊：《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID：27353337
作者：Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影响因子：4.259
期刊：《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID：27353337
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