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普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

产品细节图:

  • 普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

品牌:genefist | 货号:GF209-03
  • 所属大类 : 试剂
  • 所属小类 : 常用生化试剂
  • 品牌 : genefist
  • 规格 : 200次
  • 原价 : ¥784.00
  • 促销价 : ¥784.00
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    储存条件
    该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存18个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。

    产品简介
    本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统,从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。可回收100 bp-30kb大小的片段,回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为10 μg。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实
    验。如果回收前 DNA 量为 1-5ug,建议选用 DF208 超薄琼脂糖凝胶回收 kit,推荐洗脱液体积 20-50ul。

    产品特点
    快速:整个操作过程快速方便,几十分钟即可完成回收工作。
    多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。
    高效:独特的离心柱和精心配制的缓冲液,可大量回收到高纯度的目的DNA。

    注意事项
    1.电泳时应使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。
    2.如下一步实验要求较高,则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。
    3.切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤。
    4.回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。
    5.对于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。

    操作步骤
    使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
    1.完成电泳后,将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取重量(如果凝胶重为 0.1 g,其体积可视为 100 μl)。

    2.向胶块中加入 2 倍体积(如果琼脂糖凝胶浓度>2%,则加入 3 倍体积)的溶液 PN,60℃水浴孵育 5-15 min或更久,其间不断温和地上下翻转离心管,直至胶块充分溶解(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎
    块)。
    注意:胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。

    3.将吸附柱 CB2 放入收集管中,移取上一步溶胶液至吸附柱,室温放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。
    注意:若样本体积超过 700ul,可分次加入并重复此步骤。

    4.可选步骤:向吸附柱 CB2 加入 400ul 的溶液 PN,以 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃收集管中的滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中(此步骤可去除残余的琼脂糖凝胶,以避免纯化的 DNA 进行酶切反应时出现抑制现象)。

    5.向吸附柱 CB2 加入 700ul 的漂洗液,静置 1 分钟以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟,丢弃滤液,将吸附柱 CB2 放回收集管中。

    6.重复操作步骤 5。
    7.将吸附柱 CB2 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟,将吸附柱开盖置于室温放置数分钟,以去除、晾干残余的漂洗液。
    注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。

    8.将吸附柱 CB2 置于一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加 30-100ul 洗脱缓冲液 TB,室温放置 2min。12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 min 收集 DNA 溶液。

    注意:洗脱体积不应小于 30 μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有较大影响,若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;且 DNA 产物应保存在-20°C,以防 DNA 降解。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,将 DNA 溶液收集到离心管。 

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