储存条件第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存6个月。单独包装的RNaseA 在室温可稳定保存12个月。本试剂盒在室温 (15-25℃) 干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存时,若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术,高效专一地结合质粒DNA。同时采用特殊的去内毒素漂洗液和过滤器,可有效的去除内毒素、蛋白等杂质;整个提取过程仅需1h,方便快捷。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化和转染多种细胞等实验。推荐每次菌液使用量:高拷贝质粒推荐使用量为50 ml,得率一般在250-750 μg左右; 低拷贝质粒推荐使用量为100 ml,得率一般在100-300 μg左右。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液P1在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A全部加入),混匀,置于2-8℃保存。2.使用前先检查溶液P2、溶液P3是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀现象,可在37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.使用过滤器时请将推柄小心缓慢地从过滤管中抽出,避免滤膜因压力而松动。4.去内毒素溶液 ER 在多次开盖使用后,可能会有细微的颜色变化,不影响最终质粒提取效率和纯度。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加P1、P2、P3的用量;洗脱缓冲液推荐在65-70℃水浴中预热(可以适当延长吸附和洗脱时间,以提高提取效率)。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取20-50 ml(根据培养菌体的浓度选择合适的量, 低拷贝推荐用100 ml) 过夜培养的菌液加入离心管,室温10,000 rpm(~11,500×g )离心3 min收集细菌,尽量吸除上清。注意:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中,菌液量以能够充分裂解为佳,菌液过多会导致裂解不充分从而降低质粒的提取效率。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入5 ml溶液P1 (请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:请务必彻底悬浮细菌沉淀,如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解效果,导致提取量和纯度偏低。对于低拷贝质粒,加大菌体用量的同时按比例增加P1、P2、P3的用量。3.向离心管中加入5 ml溶液P2,立即温和地上下翻转6-8次,室温放置4 min。(不要超过5min,)注意:温和地混匀,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA;所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏;此时菌液应变得清亮粘稠, 如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入5 ml溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,至溶液出现白色分散絮状沉淀。然后室温放置2-3 min左右。10,000 rpm(~11,500×g )离心10 min,使白色沉淀离至管底 (可适当增加离心时间) ,将全部溶液小心倒入过滤器CS2中 (请避免倒入大量沉淀而阻塞过滤器),慢慢推动推柄过滤,滤液收集在干净的15 ml的管中(自备) 。注意:加入溶液P3后应立即混匀,避免产生局部沉淀。如果离心后倒入过滤器CS2中的溶液有白色沉淀也不会影响过滤。如果菌体过多 (>50 ml) ,推荐延长离心时间至20-30 min。5.转移 4 ml 上一步所得滤液至吸附柱 CP3 中(吸附柱放入 15 ml 收集管中),10,000 rpm(~11,500×g )离心 2 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱 CP3 重新放回收集管中。重复该步骤直至所有滤液全部通过吸附柱 CP3。6.向吸附柱CP3中加入3.5 ml去内毒素漂洗液ER,放置2分钟,10,000 rpm(~11,500×g )离心2 min,弃掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。7.向吸附柱CP3中加入3.5 ml漂洗液PW(请检查是否已加入无水乙醇),10,000 rpm(~11,500×g )2 min,弃掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。8.重复操作步骤7。9.接着10,000 rpm (~11,500×g) 离心5 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP3开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。10.将吸附柱CP3置于一个干净的15 ml收集管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加0.5-1 ml洗脱缓冲液TB,室温放置2-3 min,然后室温10,000 rpm(~11,500×g )离心2 min。将15 ml离心管中的洗脱液全部移入一个干净的1.5 ml离心管,-20℃保存。注意:洗脱缓冲液用量的多少主要是依据质粒的拷贝数以及实验所需要的浓度来确定,洗脱缓冲液体积不应少于0.5ml,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.5-8.0 范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,10,000 rpm(~11,500×g ) 离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。
储存条件第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存6个月。单独包装的RNaseA 在室温可稳定保存12个月。本试剂盒在室温 (15-25℃) 干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存时,若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃溶解沉淀。产品简介本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术,高效专一地结合质粒DNA。同时采用特殊的结合液和去内毒素漂洗液,可有效的去除内毒素、蛋白等杂质;整个提取过程仅需1h,方便快捷。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化和转染多种细胞等实验。推荐每次菌液使用量:高拷贝质粒推荐使用量为50 ml,得率一般在250-750 μg左右; 低拷贝质粒推荐使用量为100 ml,得率一般在100-300 μg左右。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液P1在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A全部加入),混匀,置于2-8℃保存。2.使用前先检查溶液P2、溶液E3是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀现象,可在37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.去内毒素溶液 ER 在多次开盖使用后,可能会有细微的颜色变化,不影响最终质粒提取效率和纯度。4.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加P1、P2、E3的用量;洗脱缓冲液推荐在65-70℃水浴中预热(可以适当延长吸附和洗脱时间,以提高提取效率)。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取20-50 ml(根据培养菌体的浓度选择合适的量,低拷贝推荐用100 ml)过夜培养的菌液加入离心管,室温10,000 rpm(~11,500×g)离心3 min收集细菌,尽量吸除上清。注意:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中, 菌液量以能够充分裂解为佳,菌液过多会导致裂解不充分从而降低质粒的提取效率。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入5 ml溶液P1 (请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:请务必彻底悬浮细菌沉淀,如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解效果,导致提取量和纯度偏低。对于低拷贝质粒,加大菌体用量的同时按比例增加P1、P2、E3的用量。3.向离心管中加入5 ml溶液P2,立即温和地上下翻转6-8次,室温放置2~4 min。注意:温和地混匀,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA;所用时间不应超过5 min,以免形成单股DNA而影响后续酶实验;此时菌液应变得清亮粘稠,如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入5 ml溶液E3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,10,000 rpm(~11,500×g)离心10 min。注意:加入溶液E3后应立即混匀,避免产生局部沉淀。如果菌体过多 ( >50 ml) ,推荐延长离心时间至20-30 min。5.将上一步收集的上清液小心移至另一新的50ml离心管(自备),加入10 ml异丙醇(需自备),上下翻转6-8次,充分混匀,10,000 rpm (~11,500×g)离心10 min ,保留管底的白色沉淀(DNA pellet),丢弃上清液。6.向离心管(底部有离心所得的白色沉淀)加入1 ml溶液BCE,用移液器吸吐使白色沉淀(DNA pellet)完全溶解。7.将上一步所得溶液(DNA 溶液)转移至吸附柱 CP3 中(吸附柱放入 15 ml 收集管中),放置 1 min ,10,000rpm (~11,500×g)离心 2 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱 CP3 放回收集管中。8.向吸附柱 CP3 中加入 2ml 溶液 BCE 溶液,放置 2 min ,10,000 rpm (~11,500×g)离心 2 min,弃掉收集管中的废液,将吸附柱 CP3 放入收集管中。9.向吸附柱CP3中加入3.5 ml去内毒素漂洗液ER,放置2 min ,10,000 rpm (~11,500×g)离心2 min,弃掉收集管中的废液,将吸附柱CP3重新放回收集管中。10.向吸附柱CP3中加入3.5 ml漂洗液PW(请检查是否已加入无水乙醇),10,000 rpm (~11,500×g)离心2 min,弃掉收集管中的废液,将吸附柱CP3重新放回收集管中。11.重复操作步骤10 。12.接着10,000 rpm (~11,500×g)离心5 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP3开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。13.将吸附柱CP3置于一个干净的15 ml收集管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加0.5-1 ml洗脱缓冲液TB,室温放置2 min,然后室温10,000 rpm (~11,500×g)离心2 min ,将15 ml离心管中的洗脱液全部移入一个干净的1.5 ml离心管,-20℃保存。注意:洗脱缓冲液用量的多少主要是依据质粒的拷贝数以及实验所需要的浓度来确定,洗脱缓冲液体积不应少于0.5ml,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.5-8.0 范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,10,000 rpm (~11,500×g)离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。
储存条件本试剂盒在室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2-8℃。(注意:当低温贮存时,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以平衡溶液温度)。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月以上。加入RNase A后的溶液P1应置于2-8℃保存,可稳定保存6个月。产品简介本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术,高效专一地结合质粒DNA。同时采用特殊的去内毒素溶液ER和过滤柱CS1,可有效的去除内毒素、蛋白等杂质;整个提取过程仅需1个小时,方便快捷。以下操作步骤适用于提取5-15 ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接等实验。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。2.使用前先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm (~13,400×g )。4.去内毒素溶液 ER 在多次开盖使用后,可能会有细微的颜色变化,不影响最终质粒提取效率和纯度。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10 kb 的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加 P1、P2、P3 的用量,洗脱缓冲液应在 65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间,以增加提取效率。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。 本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其它用途1.取5-15 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,尽量吸除上清。注意:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中, 菌体量以能够充分裂解为佳,过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μl溶液P1 (请先检查是否已加入RNaseA),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:请务必彻底悬浮细菌沉淀,如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。3.向离心管中加入500 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏。如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入500 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀,然后室温放置10 min左右,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min,此时在离心管底部形成沉淀。注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。5.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱CS1(过滤柱放入收集管中),12,000 rpm(~13,400×g ) 离心2min,小心地将过滤离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP2中(吸附柱放入收集管中),(如果过滤柱中有残余的液体,说明步骤4的上清中杂质过多,可以延长离心的时间;如果离心后收集管底部有少量的沉淀,尽量地吸取上清)。6.12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。7.向吸附柱CP2加入750 ml 去内毒素溶液ER(已经加入异丙醇),静置2分钟使管柱膜平衡,室温12,000rpm (~13,400×g)离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。8.向吸附柱CP2中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g ) 离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。注意:加入漂洗液PW后,如果室温静置2-5 min,有助于更好地去除杂质。9.重复操作步骤8.10.将吸附柱CP2重新放回收集管中,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP2开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。11.将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2 min,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min将质粒溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于100μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。产品简介本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,可高效、专一吸附DNA,另外由于增加了过滤柱,可去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。以下操作步骤适用于提取5-15ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接等实验。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液 P1 在使用前先加入 RNaseA(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。2.使用前先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有浑浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。4.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm (~13,400×g )。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb 的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加 P1、P2、P3 的用量,洗脱缓冲液应在 65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间,以增加提取效率。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取5-15 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,尽量吸除上清。注意:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中, 菌体量以能够充分裂解为佳,过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:请务必彻底悬浮细菌沉淀,如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。3.向离心管中加入500 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏。如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入500 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min,此时在离心管底部形成沉淀。注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。5.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱CS1(过滤柱放入收集管中),12,000 rpm(~13,400×g ) 离心2min,小心地将过滤离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP2中(吸附柱放入收集管中),(如果过滤柱中有残余的液体,说明步骤4的上清中杂质过多,可以延长离心的时间;如果离心后收集管底部有少量的沉淀,尽量地吸取上清)。6.12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。7.向吸附柱CP2中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g ) 离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。注意:加入漂洗液PW后,如果室温静置2-5 min,有助于更好地去除杂质。8.重复操作步骤7。9.将吸附柱CP2重新放回收集管中置于12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP2开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。10.将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2 min, 12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min将质粒溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于100μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。产品简介本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,高效、专一吸附DNA,可去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。以下操作步骤适用于提取5-15 ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。2.使用前先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。4.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm (~13,400×g )。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10 kb 的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加 P1、P2、P3 的用量,洗脱缓冲液应在 65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间,以增加提取效率。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取5-15 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,尽量吸除上清。注意:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。收集的菌体量以能够充分裂解为佳,菌体过多裂解不充分会降低质粒的提取效率。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。3.向离心管中加入500 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5min,以免质粒受到破坏。如果菌液没有变清亮,可能是由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入500 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min,此时在离心管底部形成沉淀。注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。5.将上一步收集的上清液分次加入吸附柱CP2中(吸附柱放入收集管中,其容量为750-800ul),注意尽量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。6.向吸附柱CP2中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP2放入收集管中。7.重复操作步骤6。8.吸附柱CP2放入收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP2开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。9.将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2-5 min,12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于100μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2min,将质粒溶液收集到离心管中。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。产品简介本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,高效、专一吸附DNA。由于增加了过滤柱,与普通的提取方法相比,本试剂盒可去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,适用于提取1-5 ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于转染多种细胞及各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接等实验。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。2.使用前先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。4.所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm (~13,400×g)。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取1-5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1 (请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。3.向离心管中加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏。如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入250 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min,用移液器小心地将上清转移到过滤柱CS1(过滤柱放入收集管中),注意尽量不要吸出沉淀。注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。5.12,000 rpm (~13,400×g )离心2 min,小心地将离心后收集管中得到的溶液转移到吸附柱CP1中(吸附柱放入收集管中),(如果过滤柱中有残余的液体说明步骤4吸取的上清中杂质过多,可以延长离心的时间; 如果离心后收集管底部有少量的沉淀,尽量的吸取上清)。6.12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。7.向吸附柱CP1中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g ) 离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。8.重复操作步骤7。9.将吸附柱CP1放入收集管中,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP1开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。10.将吸附柱CP1置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2 min,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min将质粒溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。低拷贝或大质粒( >10kb)提取如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按照比例增加P1、P2、P3的用量,洗脱缓冲液TB应在65-70℃水浴预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。其它步骤相同。
储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。产品简介本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,高效、专一吸附DNA。以下操作步骤适用于提取1-5ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。2.使用前请先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。4.所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm(~13,400×g )。5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。1.取1-5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm(~13,400×g ) 离心1 min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。2.向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。3.向离心管中加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏。如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。4.向离心管中加入250 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时将出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g )离心10 min。注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。5.将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP1中 (吸附柱放入收集管中),注意尽量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g)离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。6.向吸附柱CP1中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g )离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。7.重复操作步骤6。8.将吸附柱CP1放入收集管中,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP1开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。9.将吸附柱CP1置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2min,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min将质粒溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。低拷贝或大质粒( >10kb)提取如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按照比例增加P1、P2、P3的用量,洗脱缓冲液TB应在65-70℃水浴预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。其它步骤相同
储存条件 该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中,混匀后置于2-8℃保存,可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。 产品简介 本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料,高效、专一吸附DNA。以下操作步骤适用于提取1-5ml过夜培养的大肠杆菌,质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。 使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。 注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。 1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A(将试剂盒中提供的 RNase A 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。 2.使用前请先检查溶液 P2 和 P3 是否出现浑浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄 清。 3.注意不要直接接触溶液 P2 和 P3,使用后应立即盖紧盖子。 4.所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心,速度为 12,000 rpm(~13,400×g )。 5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。 操作步骤 使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。 1.取1-5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,12,000 rpm(~13,400×g ) 离心1 min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。 2.向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。 注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。 3.向离心管中加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。 注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时 菌液应变得清亮粘稠,所用时间不应超过5 min,以免质粒受到破坏。如果未变得清亮,可能由于菌体 过多,裂解不彻底,应减少菌体量。 4.向离心管中加入250 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时将出现白色絮状沉淀。12,000 rpm (~13,400×g )离心10 min。 注意:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上 清。 5.将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP1中 (吸附柱放入收集管中),注意尽量不要吸出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g)离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。 6.向吸附柱CP1中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g )离心30-60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP1放入收集管中。 7.重复操作步骤6。 8.将吸附柱CP1放入收集管中,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去 除。 注意:漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱CP1开盖,置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。 9.将吸附柱CP1置于一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2min,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min将质粒溶液收集到离心管中。 注意:洗脱缓冲液体积不应少于50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响,若后续做测序,需使用ddH2O做洗脱液,并保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了增加质粒的回收率,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。 低拷贝或大质粒( >10kb)提取 如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按照比例增加P1、P2、P3的用量,洗脱缓冲液TB应在65-70℃水浴预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。其它步骤相同
【包装规格】产品编号 产品名称 包装 ES-8715 SuperBlot Protein-free Rapid Blocking Buffer(5×) 100ml/500ml 使用说明书 1份 【保存条件】常温运输,2-8°C保存12个月【产品特点】l快速高效:5~10 min快速完成封闭;只结合封闭转印膜而不结合蛋白,因此不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点,与传统的脱脂奶粉和BSA封闭相比信噪比更高;l性能可靠:无蛋白配方,与抗体无交叉反应;l应用范围广:无磷酸化蛋白,无生物素,尤其适合磷酸化特异抗体及生物素检测系统,包括Western Blot及Elisa检测;l增强抗体效果:使用本封闭液后,所需的最适抗体浓度低于常规使用浓度,可大大节省抗体使用量。【概述】本品专为快速高效封闭Western Blot转印膜及Elisa检测而设计,采用无蛋白配方,避免抗体与封闭剂的非特异结合,可最大程度地降低背景。同时,本封闭剂无内源的磷酸化蛋白及生物素,对磷酸化特异抗体及生物素检测也不会产生干扰。本封闭剂不与蛋白产生非特异性结合,因而只封闭膜而不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点,大大提高了抗体检测灵敏度。实验表明本封闭剂对许多抗体都有不同程度的信号增强作用。然而这种信号增强作用因抗体而异,对某一特定抗体,并不一定具有确定的信号增强作用。【使用建议】1.完成转膜后,将转印膜放入到杂交孵育盒中,加入10~20 mL TBS/T 或PBS/T;2.往TBS/T或PBS/T中加入1/4体积的无蛋白快速封闭液,置于摇床轻轻摇动,室温封闭约10min(即 配即用); 注意:使用本品通常封闭5~15min均可;经多种抗体的测试封闭10min的效果显著优于常规的BSA 封闭1 h。对于一些背景非常高的抗体,可以尝试将封闭时间延长为30~60 min。如有特殊需要也可4°C封闭过夜。3.封闭后的膜即可用于一抗孵育等后续实验。【注意事项】1.注意: 没有任何一种封闭剂能适合所有抗原和抗体检测系统。如出现本试剂不适合的抗体,请替换使用其它种类的封闭剂如BSA或脱脂奶粉等;2.本品仅用于科研用途,不得用于临床或诊断相关研究;3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
【操作方法】1. 对于贴壁细胞(以下均以6孔板为例,其它培养皿或培养板请根据相应面积换算):a.将细胞培养于培养皿或培养板内,通常在铺板后1-2天内长到70-90%。b. 在转染前1-2小时,吸去细胞培养液,更换为新鲜的不含抗生素的完全培养液2ml。c. 取2-4μg待转染的质粒DNA (质粒总体积不宜超过20μl,若有多种质粒请混匀),以质量体积比1:3加入转染试剂6~12μl(如2μg待转染的质粒DNA加入转染试剂6μl)。d.混匀后,室温孵育3-5分钟。e. 把DNA-转染试剂混合物中加入500μl opti-MEM(若无opti-MEM可使用无血清无双抗的DMEM或1640,具体根据转染细胞使用的培养基),充分混匀后静置10-15分钟。f.后均匀滴加到整个6孔板内(加入前吸出原培养板中500μl培养基),并置于含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。g. 在转染后4-6小时左右换液,更换为2ml新鲜的完全培养液,继续培养。h.通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。2. 对于悬浮细胞:a. 离心收集悬浮细胞,用PBS洗涤一次。b. 按照上面的步骤c)、d)、e)制备DNA-转染试剂-optiMEM混合物。c. 每106个细胞的沉淀,用500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物重新悬浮,室温放置15-20分钟。d. 在一个6孔板孔内加入1.5ml完全培养液,然后加入来自上一步的细胞-500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物,混匀。e. 在含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。f. 根据实验要求和转染试剂对于不同细胞的毒性不同,在4-6小时后离心收集细胞,用PBS洗一次,然后用2毫升完全培养 液重新悬浮细胞,继续培养。g. 通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。
功能与使用方法与life品牌的Trizol LS相似【保存条件】2-8℃长期保存【操作方法】I. 样本处理1. 组织样本处理:用匀浆器或其他类似设备匀化组织样本机械破坏装置,每 500μL 最多使用 50 mg 组织NewZOL LS。 对于 DNA 含量高的组织(例如脾脏),建议使用 25 mg 组织/ 500μL 试剂。2. 贴壁细胞样本处理:除去细胞培养基,通过向培养皿(直径 3.5 cm,10 cm2)中加入至少 1 mL NewZOLLS 并通过反复吸移来确保完全裂解。(根据培养皿面积而不是细胞数计算试剂量。试剂量不足将导致分离的 RNA 受到 DNA 污染。残留的匀浆可以在-20 至-80°C 下保存至少一年,以备后用。)3. 悬浮细胞样本处理:沉淀细胞,并通过添加 NewZOL LS 直接裂解。 每 5×106个细胞至少加入 500μLNewZOL LS,移液器吹打数次裂解细胞。(添加 NewZOL LS 之前请勿洗涤细胞,细胞洗涤可能会导致 RNA降解。)4. 液体样本处理:每 200μL 液体样品中加入 500μL NewZOL LS 进行均质化和裂解。对于小于 200μL 的样品体积,请添加 500μLNewZOL LS 并加水至最终体积为 700μL。5. 富含脂质样本处理:如上所述均质化富含脂质的样品。将样品以 12,000×g 离心 5 分钟。 离心后,样品顶部会出现一层脂肪。用移液器吸头尖端刺穿上层,然后将上清液转移到新管中。II. RNA 提取1. 每使用 500μLNewZOL LS 的裂解液中加入 200μL 无 RNase 的水至裂解液中。剧烈摇动样品 15 秒钟。在室温下孵育 5 分钟。(对于包含 50 mg 组织/ 500μL NewZOL LS 的样品,建议在室温下孵育 15 分钟。)2. 在室温下以12,000×g离心样品15分钟。含有DNA,蛋白质和多糖的半固体沉淀物形成在试管底部。RNA仍溶解在上清液中。3. 将 500μL 上清液转移至新管中。 勿吸太干净防止污染,在 DNA /蛋白质沉淀上方保留一小部分上清液。(含有 DNA,蛋白质和多糖的沉淀物占匀浆-水混合物总量的约 10%。)4. 加入等体积异丙醇,上下颠倒混匀以沉淀 RNA,在室温下孵育样品 10 分钟。5. 将样品以 12,000×g 离心 10 分钟,除去并丢弃上清液。通常,在管的底部以白色沉淀的形式获得 RNA。对于脾脏样品,RNA 在试管底部形成凝胶状膜。用乙醇洗涤后,膜变得更可见。6. 加入 500μL 75% 乙醇(无 RNase 水配制)洗涤,轻弹管底使沉淀悬浮,上下颠倒混匀。对于较大的试管,按比例添加 75% 乙醇溶液。7. 将沉淀以 8,000×g 的速度离心 3 分钟。移液去除沉淀中的乙醇,重复乙醇洗涤步骤一次。静置 5-10 分钟待乙醇挥发,无需过份干燥成固体,干燥成固体的 RNA 沉淀不易溶解8. 将 RNA 沉淀溶于无 RNase 的水中,在室温下涡旋 3 分钟,以实现有效溶解。将得到的 RNA 进行检测或-65℃长期保存(若需更长时间保存请添加适量 RNA Chill(ES-8520))。【注意事项】1. RNA 酶污染注意事项:a. 提取过程用品均经过去 RNA 酶处理:玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小时 ,塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水冲洗并高压灭菌,吸头及离心管类尽量使用一次性无酶吸头及离心管b. 佩戴手套及口罩及护目镜:皮肤上常含有细菌和霉菌,可污染 RNA 制备,且同时是 RNA 酶来源,同时 New ZOL LS 对皮肤有一定毒性,建议佩戴手套及口罩及护目镜。c. 尽量于通风橱内提取:避免吸入提取过程中有毒物质。2. 安全性问题:a. 本品在与皮肤接触及吞咽有毒性,可导致烧伤。与皮肤接触后,应立即用洗涤剂和大量水冲洗。如感到身体不适,应立即就医
TopPette Multi-channel •8道移液器适用于标准96孔板;• 管嘴推出器可同时推出多道吸嘴,高效省力;• 移液器下半部可360度旋转,方便移液;• 每道管嘴连件都有独立的活塞装置,维修保养便捷;• 特别的管嘴连件设计,易于观察吸嘴的密封状况。
产品规格:Each准确度:±5.00 to 1.0%Compatible Tips:Finntip:300, Flex 300颜色编码:橙色描述:Finnpipette F3 , 8-ch, 30-300µL通道数:8量程(公制):30-300µL增量:1µL精密度:2.0 to 0.3%