Mycoplasma Antibiotics Mixture (100×) 【特别提醒】 1. 冻-20会有沉淀为正常现象,常温溶解后轻摇瓶子会溶解,不影响使用效果2. 干细胞、神经细胞、原代细胞等较为敏感细胞使用上要谨慎使用3. 常规细胞(尤其污染较严重的)在早期使用时会有部分细胞死亡为正常现象,培养3-5天后即正常,背景(40-100倍镜下)相对更为干净4. 可长期代替双抗使用,若早期培养后细胞干净了(使用1-2周后),可减半使用【保存条件】 -20℃保存两年有效;4℃保存一年有效 【概述】 细胞培养基中有时加入适量浓度的抗生素,可以有效防止微生物的污染。本品含有抗支 原体药物,在细胞培养中不需额外添加青霉素-链霉素双抗,使用时按照 100 倍稀释使用即 可。 【使用建议(仅供参考)】 1. 在无菌的细胞培养液中直接添加:按照每 500ml 细胞培养液添加 5ml 的比例加入双抗 Plus(100×),混匀即可使用。 2. 配制非无菌细胞培养液时加入,然后再过滤除菌:配制细胞培养液时按照每配制 1L 细胞 培养液加入 10ml 的比例加入双抗 Plus(100×),配制完成后过滤除菌即可使用。 【注意事项】 1. -20℃保存时易产生沉淀,室温或 37℃加热复溶摇匀即可。 2. 尽量避免反复冻融,建议分装使用。 3. 注意无菌操作,尽量避免污染。 4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 5. 仅用于实验室,不适合农业/家庭/临床用途使用。
80% DNA 回收率 本试剂盒基于离心吸附柱技术,适合于从各种浓度的琼脂糖凝胶中回收 50bp-30Kb DNA 片段。此外,该试剂盒也适合于从 PCR 产物中,酶促反应液中,或由各种方法获得的粗制的 DNA(包括基因组 DNA)中回收纯化 DNA。BufferPB 含有 pH 指示剂,溶液为黄色,方便判断溶液的 pH 值是否适合与 DNA 吸附柱结合。DNA 回收效率高达 80%。产品优势 ◈ 合于从各种浓度的琼脂糖凝胶中回收 50bp-30Kb DNA片段;◈ DNA 回收效率可高达 80%,纯化的 DNA 可直接用于测序、酶切、PCR 等;◈ 指示剂 Buffer PB,判断溶液 pH 值是否适合 DNA 与吸附柱结合。储存条件 该试剂盒置于(15-25)℃干燥条件下,可保存 12 个月。低温下 Buffer PB 可能会有沉淀形成,如有沉淀,使用前需在 37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。
本试剂盒对常规质粒提取步骤,Buffer P5 和 Buffer DWQ进行了优化,结合玻璃纤维素膜特异性吸附溶液中 DNA 的方法,可在 8 min 内获得高质量质粒 DNA。该方法适合从1mL-4mL 细菌培养物中提取多至 35μg 质粒 DNA。产品优势 ◈ 快速提取,8min 获得高质量质粒 DNA;◈ 质粒纯度高,内毒素含量低;◈ 玻璃纤维素膜特异吸附溶液 DNA,适合从 1mL-4mL 细菌培养物中提取多至 35μg 质粒 DNA。储存条件 本试剂盒除 RNase A 外其他组分可置于 (15-25)℃干燥条件下保存 12 个月。RNase A 室温运输,收到后请保存于 (2-8)℃。
TRIzol 是基于异硫氰酸胍/苯酚法开发的一种新型含有指示剂的总RNA 提取试剂,适用范围广泛,可以从动物组织、植物材料、微生物及培养细胞等样品中提取总 RNA。在样品裂解或匀浆过程中,TRIzol 可以保证RNA 的完整性,加入氯仿离心后,溶液会分成三层: 上层无色水相、中间层和下层粉色有机相。RNA 存在于上层水相,经过异丙醇沉淀加入RNase-Free ddH2O溶解即可得到总RNA样品。提取的总 RNA 纯度高,可用于 RT-PCR、Real-Time RT-PCR、Northern blot、芯片分析等多种下游实验。 产品优势 ◈ 提取质量高:可在1 h 内提取得率高、纯度高、完整性好的总RNA; ◈ 添加指示剂:添加了特殊指示剂,离心分层后下层为粉红色,便于吸取上清; ◈ 灵敏度高:对病毒等微量样本的提取具有更高的提取效率。 储存条件 FinePure TRIzol Reagent可在室温下运输,收到后请避光保存于(2-8)℃。
适合从 5mL-15mL 细菌培养物中提取无内毒素质粒 DNA 本试剂盒采用SDS和碱裂解法,同时采用特殊的Buffer P4和过滤柱FinePure Filtration Columns,结合玻璃纤维素膜特异性吸附溶液中DNA的方法,可有效的去除内毒素、蛋白等杂质,适合从5-15 ml细菌培养物中提取质粒DNA。整个提取过程仅需1个小时,方便快捷。纯化的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括转染一些常规的传代细胞、酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译等。本试剂盒对Buffer P2进行了优化,可以避免菌量极少时或者菌液过度老化时可能出现的单链质粒DNA,同时对Buffer P4进行了优化,可以有效避免因SDS残留导致的酶切不完全或弥散、转染效率低等情况。 产品优势◈ 快速高产:1 h 左右提取5-70 μg 质粒。◈ 应用广泛:适用于酶切、PCR、测序、连接、转化等常规实验及基因治疗、细胞显微注射、基因沉默、转染等高端实验。 储存条件本试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下保存12个月。低温下Buffer P2会有沉淀形成,使用前需在37℃孵育5-10 min重新溶解,摇匀后使用。当RNase A 加入Buffer P1 后,可在2-8℃保存6 个月。
1×PBS缓冲液(无菌)使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8006 1×PBS buffer(pH7.2-7.4) (Sterile,without Ca2+,Mg2+) 500ml 使用说明书 1份 【保存条件】 室温保存,有效期1年 【概述】 PBS(phosphate buffered solution)即磷酸盐缓冲液,能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力,是生物学中经常使用的缓冲盐溶液,用于分子克隆及细胞培养等,pH为7.2-7.4,与人体血液等渗,主要成分为磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钠以及氯化钠. 本产品为1×工作液,经过除菌处理,可直接使用。 4℃保存可延长产品保质期,长期不用建议低温保存。 【注意事项】 1. PBS溶液在低温情况下可能会产生沉淀。如果发现有沉淀产生,请置于37℃水浴至完全溶解后再使用。 2. PBS溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 3. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
RNAEx ZOL Reagent 货号:EK-5301中文名称:RNAEx ZOL RNA提取试剂(同Thermo的Trizol)规格:200ML应用:RNA提取运输条件:常温运输 【保存条件】 4ºC 避光保存一年 【概述】 RNAEx ZOL Reagent 是即用型细胞和组织总 RNA 提取试剂,该试剂是一步法苯酚和异硫氰酸胍解决方案。该试剂可保持样品 RNA 的完整性,同时破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分享成水相和有机相。RNA 存于水相,通过异丙醇沉淀回收。 此方法可完美应用于少量人类、动物、植物或细菌来源的组织和细胞,允许大量样本同时处理。整个过程可在一小时内完成,同时可避免蛋白质和 DNA 污染。 【操作方法】 1. 样品处理: a. 组织:将组织在液氮中研磨,磨碎后及时于每 50-100mg 组织中加入 1ml RNAEx ZOL Reagent,样品体积不应超过 RNAEx ZOL Reagent 体积的 10%(或使用匀浆仪器)。 b. 单层细胞:直接在培养皿中裂解细胞,如35mm直径的培养皿中加入1ml RNAEx ZOL Reagent,使用吸头吹匀促进细胞裂解。RNAEx ZOL Reagent 的试剂量基于培养的表面积而不是细胞数量(每 1cm2加入 1ml RNAEx ZOL Reagent), RNAEx ZOL Reagent试剂量不足可能会导致分离出的 RNA 有 DNA 污染。 c. 悬浮细胞:先低速离心沉淀细胞,弃培养液后加入 RNAEx ZOL Reagen(t 1ml RNAExZOL Reagent 加入至 5×106动物、植物、酵母或细菌细胞中)。加入 RNAEx ZOL Reagent 前避免洗涤细胞,这容易导致 mRNA 降解。一些酵母和细菌细胞的裂解可能需要使用均质器。 可选:一些样品可能需要额外的分享步骤,这些样品蛋白质、脂肪、多糖或细胞外基质含量高,如肌肉、脂肪组织、以及部分植物块茎。在根据上述方式处理后,于2-8°C,12000g 离心 10 分钟,移除沉淀不溶物,RNA 存于上清中。 2. 相分离 a. 将加完 RNAEx ZOL Reagent 后的样品在室温(15-30°C)静置 5 分钟,以利于样品核蛋白体完全分离 b. 按每 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 0.2ml 氯仿(自备),小心盖好样品管后,剧烈震荡 15 秒,后置于室温(15-30°C)静置 2-3 分钟。 c. 2-8°C,10000g 离心 15 分钟。离心后,混合物分离为下层(酚-氯仿相)、中间相以及上层无色水相。RNA 存在于上层无色水相中,体积约为最初加入 RNAEx ZOL Reagent 体积的 60%左右。 RNA 分离提取步骤: 1. RNA 沉淀 a. 将上述水相转移到一个新的管中,并保存有机相(若希望分离 DNA 或蛋白质)。混合异丙醇从水相中沉淀 RNA,每 1ml 用于初始裂解的 RNAEx ZOL Reagent 使用 0.5ml 异丙醇,室温(15-30°C)静置 10 分钟。 b. 2-8°C,10000g 离心 10 分钟。离心前看不出 RNA 沉淀,离心后在管侧和管底会出现胶状沉淀即为 RNA 沉淀。 2. RNA 洗涤 a. 弃上清。用 75%乙醇洗涤 RNA 沉淀一次,每毫升用于初始裂解的 RNAEx ZOL Reagent 试剂使用至少 1ml 75%乙醇,涡旋混匀后于 2-8°C,不超过 7500g 离心 5 分钟,弃上清 3. 溶解 RNA a. 在上述过程结束后,简单干燥 RNA 沉淀(空气干燥或真空干燥 5-10 分钟,不要真空离心离心干燥 RNA)。重要的是不要让 RNA 沉淀过于干燥,这将大大降低其溶解度。加入 25-200μl 无 RNase 水或 0.5% SDS,用吸头吹打几次至溶解,于 50-60°C 放置 10 分钟使 RNA 彻底溶解(注:若后续进行酶学实验,请勿使用 0.5% SDS 溶液溶 解)。溶解后置于-80°C 保存。 DNA 分离提取步骤: 1. DNA 沉淀 a. 样品加入氯仿分层后,移去上层水相提取 RNA,吸取中间层和有机层的 DNA 用乙醇沉淀。每使用 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 0.3ml 无水乙醇混匀,室温静置 2-3 分钟,2-8°C 不超过 2000g 离心 5 分钟以沉淀 DNA。 2. DNA 洗涤 a. 移去苯酚-乙醇上清液(如需要,保存上清用于蛋白质分离,操作见下)。用 0.1M 的柠檬酸钠溶液(溶于 10%乙醇的柠檬酸钠溶液)清洗沉淀的 DNA。每毫升用于初始的 RNAEx ZOL Reagent 试剂添加 1ml 溶液。每次清洗时,室温静置 30 分钟 DNA沉淀(间歇混匀),2-8°C 2000g 离心 5 分钟,弃上清。重复一次。 b. 用 75%乙醇再洗一遍 DNA 沉淀,每使用 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 1.5-2ml 75%乙醇,室温放置 10-20 分钟(间歇混匀),2-8°C 2000g 离心 5 分钟,弃上清。 c. 室温放置晾干 DNA 5-15 分钟,用 8mM NaOH 溶解 DNA。从 50-70mg 组织或 107细胞中分离的 DNA 溶于 300-600μl 8mM 的 NaOH 溶液中,浓度常为 0.2-0.3μg/μl。 注:提取的 DNA 沉淀不易溶于水和 Tris 缓冲液中,建议用弱碱溶解,8mM NaOH 的 pH值为 9,NaOH 溶液溶解后可用 TE、HEPES 调节 PH。从某些样品(尤其是组织)中提取的 DNA 中可能包含一些胶状不溶物可用>12000g 离心 10 分钟除去。 蛋白质分离操作步骤: 1. 蛋白质沉淀 a. 苯酚-乙醇上清液(每 1ml RNAEx ZOL Reagent 试剂上清体积约 0.8ml)中加入异丙醇可沉淀出蛋白质。每毫升用于初始裂解 RNAEx ZOL Reagent 试剂中添加 1.5ml 异丙醇,室温静置 10 分钟,然后 2-8°C 12000g 离心 10 分钟以沉淀蛋白质,弃上清。 2. 蛋白质洗涤 a. 用 0.3M 盐酸胍溶液(溶于 95%乙醇)洗涤蛋白质沉淀 3 次。每毫升每毫升用于初始裂解 RNAEx ZOL Reagent 试剂中添加 2ml 0.3M 盐酸胍溶液。每次洗涤中,室温静置 20 分钟,2-8°C 7500g 离心 5 分钟,弃上清,重复 3 次。最后清洗后,加入 2ml 无水乙醇,漩涡混匀蛋白沉淀,室温静置 20 分钟,然后 2-8°C 7500g 离心 5 分钟以沉淀蛋白质,弃上清。 3. 蛋白质溶解 a. 干空干燥蛋白质沉淀 5-10 分钟,用 1% SDS 溶解蛋白质,反复吹打,50°C 温浴至完全溶解,不溶物 2-8°C 10000g 离心 10 分钟去除。分离得到的蛋白质样品可用于WesternBlot 或者-20°C 保存(长期保存建议-80°C) 1. RNA 酶污染注意事项: a. 提取过程用品均经过去 RNA 酶处理:玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小时 ,塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水冲洗并高压灭菌,吸头及离心管类尽量使用一次性无酶吸头及离心管 b. 佩戴手套及口罩及护目镜:皮肤上常含有细菌和霉菌,可污染 RNA 制备,且同时是RNA 酶来源,同时 RNAEx ZOL Reagent 对皮肤有一定毒性,建议佩戴手套及口罩及护目镜。 c. 尽量于通风橱内提取:避免吸入提取过程中有毒物质。 2. 安全性问题: a. 本品在与皮肤接触及吞咽有毒性,可导致烧伤。与皮肤接触后,应立即用洗涤剂和大量水冲洗。如感到身体不适,应立即就医 3. 存储性问题: a. 实验已证明 RNAEx ZOL Reagent 室温下可稳定保存 12 个月,不过依然建议储存于2-8°C 以保证最佳性能,尽量避光保存。
RNA提取辅助试剂100ml(氯仿替代物),可有效避免氯防购买不到的烦恼可以代替氯仿使用,并且毒性较小。在单步 TRI 试剂方法中使用可以减少 DNA 污染 RNA 的可能性,本品不会对分离的 RNA 的质量或数量产生不利影响。 【操作方法】1. 请按每使用 1ml TRI 试剂(Trizol 试剂或 RNAEx ZOL 总 RNA 提取试剂)加入 200μl 比例来使用(等同RNA 提取中氯仿的使用)。 【注意事项】1. 如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用,以免污染。2. RNAEx ZOL 总 RNA 提取试剂(货号:EK-5301)可在 ECOTOP 各平台咨询购买。3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
DNase/RNase-free water(DEPC treated,Sterile)【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 无酶无菌水是超纯水经 DEPC 处理后,再高压灭菌而得到的不含 DNA 酶或 RNA 酶的 无菌水。经检测无核酸酶和蛋白酶活性,可用于 cDNA 合成、体外转录、RNA 提取等对核 酸酶敏感的分子生物学试验和相关产品的稀释或溶解。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用,不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Evans Blue Stain Solution 0.5% 【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝,分子式 C34H24N6Na4O14S4,分子量为 960.80,CAS号为 314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂,因其分子量大小和血浆白蛋白相近,而且在血液中和血浆白蛋白有很高的亲和力,因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障(BBB)的完整性,也用于细胞染色区分活细胞、死细胞,亦可测定血容量。 伊文思蓝和台盼蓝都是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量,其中 0.5%为最常用的浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色,因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞和活细胞,但无法区分死亡和坏死。 【使用建议】 (一)血脑屏障通透性 1. 取处理后的实验动物(以小鼠为例),静脉注射 Evans Blue Stain Solution(0.5%)数秒至 1 分钟,小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5~1h 后处死小鼠,取目的脑组织。 2. 脑组织置于 1.5ml 离心管中,加入 1ml PBS, 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆,离心。 3. 取上清,加入等量三氯乙酸,4℃孵育 18~24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清,按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮,室温孵育 24h。 4. 1000g 离心 20~30 min 或 2000g 离心 15min。5. 取上述溶液 1~2ml,用分光光度计测 620 nm 处吸光值(OD 值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的 OD 值,绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。 (二)活细胞染色 1、取 100μl 重悬细胞到常规 1.5ml 或 0.5ml 离心管内,加入 100μl 伊文思蓝染液轻轻混匀,染色 3min(染色时间可适当延长,但不宜超过 10min)。 2、吸取少量经过染色后的细胞,用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量,每个细胞样品至少数 500 个细胞,数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下: 细胞存活率=(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100% 【注意事项】 1. 伊文思蓝对人体有轻微毒性,请小心防护。 2. 细胞染色时,注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。 3. 血脑屏障通透性实验中,伊文思蓝染色液注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。 4. 最好采用低温冷冻离心机进行离心。 5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
GoldView II Nuclear Staining Dyes(10000×)【保存条件】 4℃长期保存,短期室温保存 【概述】 GoldViewⅡ是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,采用琼脂糖电泳检测 DNA 时,可与核酸结合后能产生很强的荧光信号。 【操作方法】 1. 琼脂糖凝胶中添加 GoldViewⅡ: 根据需要配制适当浓度(例如 1-3%)的琼脂糖胶液。在琼脂糖完全融解后,适当冷却但又不会使琼脂糖凝固时,按照每 100ml 胶液加入 10µl GoldViewⅡ (比例 10000:1)。混匀后即可把琼脂糖胶液倒入制备凝胶的模具中。适当量的 DNA 或 RNA 在该胶中电泳后,用约 500nm 波长蓝光激发或相应的凝胶成像系统检测(也可以使用常规的紫外灯或紫外凝胶成像检测系统),就可以观察到明亮的核酸条带。 2. 电泳完毕后对琼脂糖凝胶染色: 按照每 100ml 的 100mM NaCl 溶液或水中加入 10µl GoldViewⅡ,配制成染色工作液。把电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当的容器中,加入适量上述配制好的 GoldViewⅡ染色工作液,确保至少盖住凝胶。在摇床上缓慢摇动(30-50rpm)染色 20-30 分钟。染色的时间根据胶的厚度而定,胶厚则染色时间需要长一些,胶薄则染色时间可以短一些。染色完毕后,在紫外灯下即可观察核酸条带。 【注意事项】 1. GoldViewⅡ不属于有毒有害物质,并通过了环境安全相关测试,相关废弃物无需特殊处理,可参考常规化学试剂进行处理。 2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。 3. GoldViewⅡ相对 EB 毒性较小,但为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。