FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)
FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)
SDS-PAGE Gel Preparation Kit产品介绍SDS-PAGE 蛋白电泳制胶试剂盒提供了配制 SDS-PAGE 凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制 PAGE 胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒不仅可用于配制 SDS-PAGE凝胶,也可用于配制非变性(native)PAGE 凝胶。本试剂盒约可配制 30-50 块常规大小的 PAGE 胶存储条件1M Tris-HCl pH8.8、10% SDS、凝胶聚合催化剂(粉末状态)和 1M Tris-HCl pH6.8 室温保存。30% Acr-Bis(29:1)和 TEMED 4℃避光保存。凝胶聚合催化剂加水配制成 10%溶液后,分装成小管-20℃保存,通常半年内有效(建议分次称量配制)。需要额外准备的材料□ 制胶器具□ 去离子水开始前试剂准备 使用前应配制新鲜的 10%凝胶聚合催化剂溶液,且在-20℃分装冻存。最优是分批使用前配制,尽量不要一次全部配制使用。
Bradford Protein Assay Kit 【包装规格】 【保存条件】 BSA 存于-20℃,其它试剂 4℃保存稳定 12 个月。【概述】考马斯亮兰 G-250 染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由 465nm 变为 595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值 A595 与蛋白质浓度成正比。Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙醇的浓度可高达 1M,二硫苏糖醇的浓度可高达 5mM,但受略高浓度的去垢剂影响,需确保SDS 的浓度低于 0.1%,Triton X-100 低于 0.1%,Tween 20, 60, 80 低于 0.06%。【使用方法】1. 蛋白标准液的准备a. 蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质,也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存,请完全融化并混匀后使用。b. 按照下表配制 0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/ml 蛋白标准。每次稀释时注意充分混匀。如果有必要可以增加设置 0.0625mg/ml 的蛋白标准。2. 蛋白浓度测定a. 取 5µl 不同浓度蛋白标准加到 96 孔板的蛋白标准孔中。b. 取 5µl 样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 5µl,需加标准品稀释液补足到 5µl。请注意记录样品体积。c. 各孔加入 250µl G250 染色液。d. 用酶标仪测定 A595,或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度,也可以在 2 小时内测定,2 小时内检测数据无显著变化。e. 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品中的蛋白浓度。【注意事项】1. 本品 BSA 因每次使用量较小,推荐分装使用。2. 不同 96 板的吸收值会有不同,得到 OD 有区别为正常现象(保证数据呈线性关系)3. 请使用 96 孔底部透明板(如普通细胞培养板)检测,最佳波长为 595nm。4. 将 G250 染色液回复至室温后使用,有利于提高检测灵敏度。5. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
BCA Protein Assay Kit 【保存条件】 BCA 试剂 A 室温避光保存 1 年 BCA 试剂 B 室温保存 1 年 蛋白标准品-20℃保存 1 年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之 一 BCA 法研制而成, 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高,检测浓 度下限达到 25µg/ml,最小检测蛋白量达到 0.5µg,待测样品体积为 1-20µl。在 50-2000µg/ml 浓度范围内有 较好的线性关系。 BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达 5%的 SDS,5%的 Triton X-100,5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保 EDTA 低于 10mM,无 EGTA,二硫苏糖醇(DTT) 低于 1mM,β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不适用 BCA 法时建议试用本司生产的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制 BCA 工作液: 依据样品数量,将试剂 A 和试剂 B 按体积比 50:1 配制适量 BCA 工作液,并充分混匀。 注:配制 BCA 工作液前请将试剂 A 摇晃混匀,观察是否析出结晶,如若析出结晶,可 37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品: 蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,如果蛋白样品所在溶液不含有 干扰本试剂盒检测的物质,也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存,请完全融化并混匀后使用。具体如下表:3.蛋白浓度的检测a. 取 5µl 不同浓度蛋白标准加到 96 孔板的蛋白标准孔中。b. 取 5µl 样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 5µl,需加标准品稀释液补足到 5µl。请注意记录样品体积。c. 各孔加入 195µl BCA 工作液。 37℃放置 30 分钟。注:也可以室温放置 2 小时,或 60℃放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。d. 用酶标仪测定 A595,或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度,也可以在 2小时内测定,2 小时内检测数据无显著变化。4.数据计算a.以不同浓度的蛋白标准液为横坐标b. 以不同浓度的蛋白标准测得 OD 值(多孔则为平均 OD)为纵坐标c. 建立线性关系,获得公式(如右图中所示(本产品实际检测),若测得样品 OD=0.6 则 0.6=0.4995x+0.4151,计算得浓度 x=0.37mg/ml)【注意事项】1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 不同 96 板的吸收值会有不同,得到 OD 有区别为正常现象(保证数据呈线性关系)。3. 蛋白标准液(5mg/ml)收到后尽快分装,避免反复冻融。4. BCA 试剂 A 在低温环境下会析出结晶,可适当 37℃水浴促溶后使用。5. 请使用 96 孔底部透明板(如普通细胞培养板)检测,最佳波长为 595nm。
BCA Protein Assay Kit 【保存条件】 BCA 试剂 A 室温避光保存 1 年 BCA 试剂 B 室温保存 1 年 蛋白标准品-20℃保存 1 年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之 一 BCA 法研制而成, 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高,检测浓 度下限达到 25µg/ml,最小检测蛋白量达到 0.5µg,待测样品体积为 1-20µl。在 50-2000µg/ml 浓度范围内有 较好的线性关系。 BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达 5%的 SDS,5%的 Triton X-100,5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保 EDTA 低于 10mM,无 EGTA,二硫苏糖醇(DTT) 低于 1mM,β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不适用 BCA 法时建议试用本司生产的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制 BCA 工作液: 依据样品数量,将试剂 A 和试剂 B 按体积比 50:1 配制适量 BCA 工作液,并充分混匀。 注:配制 BCA 工作液前请将试剂 A 摇晃混匀,观察是否析出结晶,如若析出结晶,可 37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品: 蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,如果蛋白样品所在溶液不含有 干扰本试剂盒检测的物质,也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存,请完全融化并混匀后使用。具体如下表:3.蛋白浓度的检测a. 取 5µl 不同浓度蛋白标准加到 96 孔板的蛋白标准孔中。b. 取 5µl 样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 5µl,需加标准品稀释液补足到 5µl。请注意记录样品体积。c. 各孔加入 195µl BCA 工作液。 37℃放置 30 分钟。注:也可以室温放置 2 小时,或 60℃放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。d. 用酶标仪测定 A595,或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度,也可以在 2小时内测定,2 小时内检测数据无显著变化。4.数据计算a.以不同浓度的蛋白标准液为横坐标b. 以不同浓度的蛋白标准测得 OD 值(多孔则为平均 OD)为纵坐标c. 建立线性关系,获得公式(如右图中所示(本产品实际检测),若测得样品 OD=0.6 则 0.6=0.4995x+0.4151,计算得浓度 x=0.37mg/ml)【注意事项】1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 不同 96 板的吸收值会有不同,得到 OD 有区别为正常现象(保证数据呈线性关系)。3. 蛋白标准液(5mg/ml)收到后尽快分装,避免反复冻融。4. BCA 试剂 A 在低温环境下会析出结晶,可适当 37℃水浴促溶后使用。5. 请使用 96 孔底部透明板(如普通细胞培养板)检测,最佳波长为 595nm。
10% SDS Solution 【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 SDS 即 Sodium dodecyl sulfate,中文名为十二烷基硫酸钠。常用生化试剂,用途广泛,可以用于 SDS-PAGE、细菌碱裂解等。10% SDS 溶液为 100ml 溶液中含有 10g SDS,该溶液用超纯水配制,经 022μm 滤膜过滤处理。 【注意事项】 1. 环境温度较低时,10% SDS 溶液会产生大量白色沉淀,可通过 37℃水浴促溶。 2. 本产品对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。 3. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
30%丙烯酰胺溶液 (29:1)使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-817430% Acr-Bis Solution (29:1)100ml/500ml使用说明书 1份 【保存条件】 4℃避光保存,有效期1年 【概述】 30% Acr-Bis Solution (29:1) 即为含30% acrylamide-bisacrylamide的水溶液,其中acrylamide和bisacrylamide的比例为29:1。 30% Acr-Bis Solution (29:1) 常用于配制丙烯酰胺凝胶(PAGE胶),包括SDS-PAGE胶等,可以用于蛋白或核酸的分离。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(acrylamide,简称Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(bisacrylamide,简称Bis)在催化剂的作用下,通过自由基引发聚合反应,形成不带电荷、且具有分子筛性质的网状结构。其孔径大小由聚合链的长度和交联度所决定。 聚合链的长度与丙烯酰胺浓度有关,交联度由Acr与Bis的相对比例决定,调节单体丙烯酰胺与交联剂(Bis)的浓度比例,可形成具有不同交联度的网状聚合物。其中Bis的浓度越低,凝胶的孔径越大,适用于分离较大的分子;Bis的浓度越高,网孔越小,分辨率越高,越有利于分离较小的分子。 【注意事项】 1. 本产品对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
ECOTOP生产的苏木素伊红(HE)染色试剂盒(Hematoxylin and Eosin Staining Kit)综合了多种经典的HE染色方法,例如Harris法、Mayer法等,简化了操作步骤,缩短了操作时间,并且染色液内不使用汞、甲醇等有毒试剂。可以用于组织切片或培养细胞的染色。苏木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining),也被称作苏木精染色,是最常用的组织和细胞的染色方法之一。无色的苏木素(hematoxylin)氧化后形成有醌环结构(quinoid ring)的氧化苏木素(hematein or haematein),从而可以和三价的铝离子、铁离子等形成有颜色的带正电荷的复合物(如hematein-Al3+ complexes)。氧化苏木素(也称氧化苏木精)和铝离子等形成有色的复合物的过程也被称为Dye Lake Formation。细胞核内基因组DNA的双螺旋结构中,双链上的磷酸基团向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的氧化苏木素复合物结合,从而形成细胞核染色。苏木素染色液有多种不同的配制方法,不同的方法可以把细胞核染色成不同深浅的蓝色或蓝紫色。伊红(eosin)是一种化学合成的酸性染料,在水中解离成带负电荷的阴离子,可以和蛋白质氨基上带正电荷的阳离子结合,从而使细胞胞浆染成不同程度的红色或粉红色,与苏木素染色液染色形成的蓝色细胞核形成鲜明对比,从而使苏木素伊红(HE)染色成为病理组织切片中最广泛使用的一种常规染色方法。苏木素伊红染色后细胞核呈现蓝色,细胞浆呈现粉红色或红色。
Hygromycin B solution 50mg/ml 10ml【保存条件】4℃保存,一年有效【概述】潮霉素 B 是一种氨基糖苷类抗生素,可通过抑制蛋白质合成来对抗细菌,真菌和高级真核生物。潮霉素 B最初是作为抗蠕虫药开发的,在研究实验室中主要用于选择和维持带有潮霉素抗性基因的细胞。【操作方法】1. 常用筛选浓度注意:潮霉素 B 用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为 50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。一般而言,哺乳动物细胞 50-500μg/mL;细菌/植物细胞 20-200μg/mL;真菌 300-1000μg/mL。2. 杀灭曲线的建立注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择 5 个浓度。1)第一天:未转化的细胞按照 20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2 培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。2)根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定 50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者 PBS buffer 按照 1:10 的比例将母液稀释到 5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。3)第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。4)接下来每 3-4 天更换新的含药物培养基。5)按照固定的周期(如每 2 天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是 7-10 天)内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。3. 稳定转染细胞的筛选1)转染 48h 后,用含有适当浓度的潮霉素 B 筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过 25%。2)每隔 3-4 天更换含有药物的筛选培养液。3)筛选 7 天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。4)挑取并转移 5-10 个抗性克隆于 35mm 细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养 7 天。5)之后更换正常培养基培养即可。【注意事项】1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 本品为有毒化合物,避免与皮肤和眼睛接触,请小心操作。
【保存条件】 建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃避光保存,有效期 1 年 【概述】 5×SDS-PAGE 双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解,并在SDS-PAGE 运行期间防止 pH 值变化。一些蛋白质对在 Tris 缓冲液中电泳期间温度波动引起的 pH 变化敏感,优化后的上样缓冲液组分可防止在 SDS-PAGE 电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被 SDS 掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS 还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT 可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。上样缓冲液包含两种跟踪染料:蓝色(溴酚蓝),用于跟踪电泳的进度;粉红色(pyroninY),用于在 Western 印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 【使用建议】 1. 室温或 37℃水浴解冻 5×SDS-PAGE 双色蛋白上样缓冲液,并摇晃混匀。2. 请按每 40μl 蛋白样品加入 10μl 上样缓冲液的比例(5 倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。3. 混匀后,100℃水浴加热 5-10 分钟,使蛋白变性。4. 冷却至室温后,10000-14000rpm 离心 2-5 分钟,取上清直接上样电泳即可【注意事项】 1. DTT 对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。2. 该产品于-20℃保存时会出现 SDS 沉淀,使用前请确保溶液完全复溶混匀,有必要时可置于 37℃水浴促溶。3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂,PH 值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为 8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在 30kd 左右, 胶浓度为 12%时,约在 20kd 左右,胶浓度为 15%时,大概在 10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。5. 一般而言,吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的 SDS 聚丙烯酰胺凝胶(例如15%)中,吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。6. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit【保存条件】 -20℃保存一年【使用建议(仅供参考)】 1. 准备溶液:室温融解试剂盒中的三种试剂,溶解后立即放置在冰上,混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂 CE I/II 及细胞核蛋白抽提试剂 NE 备用,在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂混合物及 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM(现配现用)。 A: 对于贴壁细胞:用 PBS 洗一遍,用细胞刮子刮下细胞,或用 EDTA 溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧,并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞,尽最大努力吸尽上清,留下细胞沉淀备用。(注:尽量避免用胰酶消化细胞,以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。) B: 对于悬浮细胞:用预冷的 PBS 清洗一遍,离心收集细胞,尽最大努力吸尽上清,留下细胞沉淀备用。2. 每 20 微升细胞沉淀加入 100 微升添加了 PMSF 和蛋白酶抑制剂的细胞浆蛋白抽提试剂CE I。(对于 200 万 HeLa 细胞,其细胞沉淀的体积大约为 20 微升或 40 毫克。) 2. 每 20 微升细胞沉淀加入 100 微升添加了 PMSF 和蛋白酶抑制剂的细胞浆蛋白抽提试剂 CE I。(对于 200 万 HeLa 细胞,其细胞沉淀的体积大约为 20 微升或 40 毫克。)3. 最高速剧烈涡旋 5-10 秒,把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开,可以适当延长 vortex 时间。)4. 冰浴 10-15 分钟。(过程中可适当涡旋 2-3 次)5. 4℃下 3000rpm 转速下离心 5 分钟。6. 收集上清液(上清为细胞质提取物,储存在-80℃或准备加入 Western Blot 实验中。注意此时沉淀并不致密)7. 将步骤 6 中沉淀重悬于 100 微升细胞浆蛋白抽提试剂 CE II 中。8. 4℃下 3000rpm 转速下离心 5 分钟,除去上清液(剩余沉淀为细胞核)。若想更好的清洗细胞核,可重复步骤 7 和步骤 8 一次。9. 向此沉淀物中添加等体积的细胞核蛋白抽提试剂 NE(即,如果沉淀为 40 µL,则添加 40µL NE)10. 将沉淀重悬并在冰上孵育 10 分钟(过程中可适当涡旋 3-5 次)。11. 在 4℃下以 14,000 rpm 离心 5 分钟。12. 收获上清液(这是核提取物)。13. 将提取物储存在-80℃或准备加入 Western Blot 实验中。【注意事项】1. 尽量减少反复冻融的次数,以免效率下降。2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
BCA Protein Assay Kit 【保存条件】 BCA 试剂 A 室温避光保存 1 年BCA 试剂 B 室温保存 1 年蛋白标准品-20℃保存 1 年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一 BCA 法研制而成, 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高,检测浓度下限达到 25µg/ml,最小检测蛋白量达到 0.5µg,待测样品体积为 1-20µl。在 50-2000µg/ml 浓度范围内有较好的线性关系。BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达 5%的 SDS,5%的Triton X-100,5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保 EDTA低于 10mM,无 EGTA,二硫苏糖醇(DTT) 低于 1mM,β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不适用BCA 法时建议试用本司生产的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制 BCA 工作液:依据样品数量,将试剂 A 和试剂 B 按体积比 50:1 配制适量 BCA 工作液,并充分混匀。注:配制 BCA 工作液前请将试剂 A 摇晃混匀,观察是否析出结晶,如若析出结晶,可 37℃水浴促溶。2.稀释蛋白标准品:蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质,也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存,请完全融化并混匀后使用。具体如下表:3.蛋白浓度的检测a. 取 5µl 不同浓度蛋白标准加到 96 孔板的蛋白标准孔中。b. 取 5µl 样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 5µl,需加标准品稀释液补足到 5µl。请注意记录样品体积。c. 各孔加入 195µl BCA 工作液。 37℃放置 30 分钟。注:也可以室温放置 2 小时,或 60℃放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。d. 用酶标仪测定 A595,或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度,也可以在 2小时内测定,2 小时内检测数据无显著变化。4.数据计算a.以不同浓度的蛋白标准液为横坐标b. 以不同浓度的蛋白标准测得 OD 值(多孔则为平均 OD)为纵坐标c. 建立线性关系,获得公式(如右图中所示(本产品实际检测),若测得样品 OD=0.6 则 0.6=0.4995x+0.4151,计算得浓度 x=0.37mg/ml)【注意事项】1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 不同 96 板的吸收值会有不同,得到 OD 有区别为正常现象(保证数据呈线性关系)。3. 蛋白标准液(5mg/ml)收到后尽快分装,避免反复冻融。4. BCA 试剂 A 在低温环境下会析出结晶,可适当 37℃水浴促溶后使用。5. 请使用 96 孔底部透明板(如普通细胞培养板)检测,最佳波长为 595nm。
从各种浓度的琼脂糖凝胶中回收70bp-100Kbp DNA片段产品组成产品介绍本试剂盒采用可高效、专一结合 DNA 的硅基质材料和独特的缓冲液系统,可从各种浓度的 TAE 或TBE 琼脂糖凝胶上回收 70bp-10kbp 大小的 DNA 片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质,回收率可达 80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的 DNA 量为 20μg。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。存储条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存 12 个月,更长时间的保存可置于 2-8℃。2-8℃保存条件下,Buffer QG 可能产生沉淀,使用前可在 55℃水浴中预热 10 min 以溶解。需要额外准备的材料□ 无水乙醇(96%-100%)□ 无菌 1.5ml 离心管开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。□ 电泳时最好使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。□ 如下一步实验要求较高,核酸电泳时则应尽量使用 TAE 电泳缓冲液。□ 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤。□ 如果回收率较低,可在胶充分溶解后检测 pH 值,如 pH 值大于 7.5,可向含有 DNA 的胶溶液中加10-30µl 3M 醋酸钠(pH5.2)将 pH 值调到 5-7 之间。□ 回收<70bp 或>10kb 的 DNA 片段时,应加大 Buffer QG 的体积,延长吸附和洗脱时间。□ 回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。□ 高温及潮湿等不利环境因素对吸附柱产生影响,请将吸附柱储存于阴凉干燥的环境中。开始前试剂准备□ 按瓶子标签所示,加入 4 倍体积的无水乙醇稀释 Buffer PW,于室温密封保存。□ 确认 Buffer QG 溶液显示为黄色。DNA 浓度及纯度检测 回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、40μg/ml 单链DNA。 OD260/OD280 比值应为 1.7-2.0,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用 ddH2O 比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。操作步骤:1. 配制所需浓度的琼脂糖凝胶,电泳分离 DNA 片段。当 DNA 片段分离后,将凝胶置于紫外灯下,用干净锋利的手术刀快速切下含目的片段大小的 DNA 凝胶。为避免 DNA 片段受到损伤,应尽量减少凝胶的紫外照射时间,切胶时应尽量切去多余凝胶。2. 放入 1.5ml 离心管中并称取凝胶块的重量,加入 3 倍体积的 Buffer QG(如凝胶称重结果为 100mg,则其体积约等于100µl,应加入 300µl Buffer QG)。对于>2%的琼脂糖凝胶,添加 6 倍体积的 Buffer QG。3. 50℃水浴 10min(或直至凝胶完全溶解即可),水浴期间可颠倒混匀加速溶胶。注意:若回收<300bp 的 DNA 片段可在完全溶胶后加入一倍凝胶体积的异丙醇以提高回收率;胶块完全溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在室温时结合 DNA 能力较强。4. 凝胶完全溶解后,检查颜色是否为黄色(类似于没有溶解琼脂糖的 Buffer QG)。如果混合物的颜色为橙色或紫色,则加入 10µl 3 M 醋酸钠(pH 5.0)并混合,混合物的颜色会变成黄色。DNA 吸附到膜上仅在 pH ≤ 7.5 时有效。Buffer QG 含有一种 pH 指示剂,在 pH ≤7.5 时为黄色,在较高 pH 时为橙色或紫色,可通过颜色轻松确定 DNA 结合的最佳 pH。5.(选做)向上述溶胶液中加入 1 倍凝胶体积的异丙醇并混合。例如,如果琼脂糖凝胶切片为 100mg,则添加 100µl 异丙醇。此步骤增加了≤500bp 和≥4 kb 的 DNA片段的产量。对于 500bp-4kb 之间的 DNA 片段,添加异丙醇对产量没有影响。6. 将吸附柱套在 2ml 收集管中,并将上一步得到的溶液加入到吸附柱中,≥8000×g(≥10,000 rpm)离心 30s,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。吸附柱最大容量为 700µl,若样品体积大于 700µl,可分批加入;为提高回收率,可短暂离心用于溶胶的 1.5ml 离心管后再将溶液转移如吸附柱。7. 向吸附柱中加入 500µl Buffer PW(已加入无水乙醇),≥8000×g(≥10,000 rpm)离心 30s,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。注意:如果回收的 DNA 是用于盐敏感的实验,例如平末端连接实验或直接测序,建议加入 Buffer PW后静置 2-5min 后再离心。8. 重复操作步骤 7 一次9. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中,最大转速 (~13,400×g)离心 2min 以干燥吸附柱膜,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱套入新的1.5ml 离心管中并于室温开盖放置 5-10min 彻底晾干。注意:Buffer PW 中的乙醇残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。10. 向吸附柱膜中央位置悬空滴加 30-50µl Buffer EB,盖上盖子室温静置 2min 后,最大转速 (~13,400×g)离心 2min 收集 DNA 溶液并置于-20℃保存。注意:洗脱体积不应小于 30μl,体积过少影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序,需使用 ddH2O 做洗脱液,并保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率。为了提高 DNA 的回收量,可重复操作步骤 10 一次。常见问题:1.回收效率低 凝胶未充分溶解:溶胶时,50~55℃水浴 10min,其间颠倒混匀数次,让凝胶充分溶解。 凝胶用量过多:过量的凝胶会降低回收率,切胶时尽量去除多余的凝胶。 溶胶液不足:3 倍体积的 Buffer QG 是为了保证在各种浓度的琼脂糖凝胶中都能有较好的回收率,尽量不要节省。 洗脱不充分:建议用 Buffer EB 洗脱两次,以获得最高的回收率,洗脱液必须加入柱子的膜中央。 试剂准备有误:Buffer PW 没有加入乙醇稀释或体积不准确(乙醇浓度需控制在 80%)。2. 回收后出现杂带 DNA 变性:有些 DNA 片段对温度比较敏感,杂带有可能是单链的 DNA。降低溶胶温度至 37~50℃。降低温度,可延长溶胶时间至 20~40min 让凝胶充分溶解。3. 盐污染 A260/230 太低:Buffer QG 溶液中的异硫氰酸胍在 A230 中有较高的吸收峰。使用该产品,A260/230 通常小于 1.0。实验表明,该产品得到的 DNA 不会影响下游的运用,包括测序,连接,定量 PCR,PCR,酶切等。4. 连接不理想 乙醇污染:洗脱 DNA 前,打开柱子的盖子,空气干燥 10~15min 以彻底去除乙醇。 核酸变性:降低溶胶温度至 37~50℃。降低温度,可延长溶胶时间至 20~40min 让凝胶充分溶解。降低温度能有效减少核酸的脱嘌呤和变性的影响。
从10-250ul血液及相关体液等样品中直接提取总DNA产品介绍 本试剂盒适用于哺乳动物血液核酸提取,不含苯酚等有毒化学试剂组分,采用独特的缓冲液配方 BufferIRB 最大限度去除血液抑制剂的影响,同时应用先进的硅胶膜吸附技术,操作简单、快速。得到的 DNA比传统试剂盒纯度更高,可直接用于酶切、转化、测序及 PCR 等分子生物学实验。 存储条件 本产品除 Proteinase K 溶液和 RNase 溶液外,可在室温(15~25℃)保存 12 个月。低温下 Buffer BL 或Buffer IRB 可能会有沉淀形成,使用时需 55℃水浴让沉淀完全溶解。Proteinase K 溶液和 RNase A 溶液冰袋运输,收到产品后请分装保存于-20℃。 需要额外准备的材料 □ 无水乙醇(96%-100%)□ 无菌 1.5/2ml 离心管开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。● Buffer BL 和 Buffer IRB 是如有混浊现象,可在 55℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。● 基因组提取所有步骤都在室温(15-25°C)下进行。 开始前试剂准备 □ 按瓶子标签所示,Buffer BL 及 Buffer IRB 中加入适量的无水乙醇稀释,于室温密封保存。 DNA 浓度及纯度检测 回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测纯度与浓度。 DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、40μg/ml 单链DNA。 OD260/OD280 比值应为 1.7-2.0,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用 ddH2O,比值会略低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。 应用领域 该方案适合于从约 10μl-1ml 人类的抗凝血液、血清、血浆、尿液、或其它体液样品中直接提取总 DNA。该方案直接对样品进行裂解消化,获得的 DNA 包括了基因组 DNA(如淋巴细胞、线粒体 DNA、游离的DNA(>100bp)、以及病毒 DNA(如乙肝)等;
【保存条件】-20℃保存一年 【概述】细胞培养基中有时加入适量浓度的抗生素,可以有效防止微生物的污染。本品青霉素的含量为 10kU/ml,链霉素的含量为 10mg/ml。该溶液用 0.9%氯化钠配制,经 0.22μm 滤膜过滤除菌,使用时按照 100 倍稀释使用即可。 【使用建议(仅供参考)】1. 在无菌的细胞培养液中直接添加:按照每 500ml 细胞培养液添加 5ml 的比例加入青链霉素混合液(100×),混匀即可使用。2. 配制细胞培养液时加入,然后再过滤除菌:配制细胞培养液时按照每配制 1L 细胞培养液加入 10ml 的比例加入青链霉素混合液(100×),配制完成后过滤除菌即可使用。 【注意事项】1. 尽量减少反复冻融的次数。2. 注意无菌操作,尽量避免污染。3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品特点● 符合人体工学设计,按压轻便● 量程范围0.1ul – 10ml● 简易拆装便于保养清洗● 管嘴连件耐化学腐蚀● 提供的附件工具能简单快速地校准和维修● 不同颜色上盖区分不同量程移液器和按压档位● 每支移液器都遵照ISO8662进行校准● 枪头适配性好,市面常见品牌均可正常使用
产品特点 ● 符合人体工学设计,按压轻便 ● 量程范围0.1ul – 10ml ● 简易拆装便于保养清洗 ● 管嘴连件耐化学腐蚀 ● 提供的附件工具能简单快速地校准和维修 ● 不同颜色上盖区分不同量程移液器和按压档位 ● 每支移液器都遵照ISO8661进行校准 ● 枪头适配性好,市面常见品牌均可正常使用
产品特点 ● 符合人体工学设计,按压轻便 ● 量程范围0.1ul – 10ml ● 简易拆装便于保养清洗 ● 管嘴连件耐化学腐蚀 ● 提供的附件工具能简单快速地校准和维修 ● 不同颜色上盖区分不同量程移液器和按压档位 ● 每支移液器都遵照ISO8660进行校准 ● 枪头适配性好,市面常见品牌均可正常使用