Hoechst33342 Stain Solution(1mg/ml)【保存条件】 -20℃避光保存,有效期 1 年。 【概述】 Hoechst 33342,也称 bisBenzimide H 33342 或 HOE 33342。分子式为C27H28N6O·3HCl·3H2O,分子量为 615.99,CAS Number 23491-52-3。Hoechst 33342 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,对细胞的毒性较低。Hoechst33342 染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst33342 也常用于普通的细胞核染色,或常规的 DNA 染色。Hoechst 33342 的最大激发波长为 346nm,最大发射波长为 460nm;Hoechst 33342 和双链 DNA 结合后,最大激发波长为 350nm,最大发射波长为 461nm。本 Hoechst 33342 染色液浓度为 1mg/ml,可稀释后用于固定细胞或组织的细胞核染色,也可稀释后用于活细胞或组织的细胞核染色。 【使用方法】 使用前用生理盐水或 PBS 将 Hoechst 33342 染色液稀释 100 倍,即为工作液。 A 对于固定的细胞或组织: 1. 对于细胞或组织样品,固定后,适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色,则先进行免疫荧光染色,染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33342 染色。如果不需要进行其它染色,则直接进行后续的 Hoechst 33342 染色。 2. 对于贴壁细胞或组织切片,加入少量 Hoechst 33342 工作液,覆盖住样品即可;对于悬浮细胞,至少加入待染色样品 3 倍体积的工作液,混匀。室温放置 3-5 分钟。 3. 吸除 Hoechst 33342 染色液,用 TBST、PBS 或生理盐水洗涤 2-3 次,每次 3-5 分钟。 4. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时,会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。 B 对于活细胞或组织: 1. 加入适当量 Hoechst 33342 工作液,必须充分覆盖住待染色的样品,通常对于六孔板一个孔需加入 1mL 工作液,对于 96 孔板一个孔需加入 100μL 工作液。 2. 在适宜于细胞培养的温度下培养 20-30 分钟。弃染色液,用 PBS 或培养液洗涤 2-3 次即可进行荧光检测。 【效果图】 本产品用于活细胞染色效果参考图:图 1.正常培养的 HeLa 细胞用本产品染色后的实拍效果图。图 A 为正常细胞 Hoehst 33342 的染色效果图。图 B 中除了正常细胞外,还清晰可见呈现致密浓染的凋亡细胞。【注意事项】 1. Hoechst 33342 对人体有害,请注意适当防护。 2. 荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。 3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 4. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。