产品编号S0180英文名称Masson-Fontana melanin stain kit中文名称Masson-Fontana黑色素染色试剂盒别 名Fontana-Masson Stain Kit; Masson-Fontana黑色素染色液;保存条件4℃避光保存,有效期3个月。产品介绍黑色素属于非血源性内生色素,是一组由黑色素母细胞产生的颜色从浅棕色到黑色的色素。这种色素通常出现在皮肤表皮、眼睛、大脑的黑质和毛囊中。黑色素有一个显著的物理性质,即完全不溶解于大多数有机溶剂——几乎可以肯定是由于黑素体中已形成的黑色素可与蛋白质紧密结合。黑色素另一个物理性质是能够被强氧化剂漂白,尽管这个过程是缓慢的。在病理情况下,这种色素也可出现在良性痣细胞瘤中和恶性黑色素瘤中。在常规HE染色中不呈黑色而是呈棕黄色或棕黑色。许多方法可用于识别黑色素和黑色素生成细胞,如还原方法:如Masson-Fontana银技术和Schmorl三价铁-铁氰化钾还原实验;酶方法:如多巴反应;荧光方法;免疫组织化学方法等。Masson-Fontana黑色素染色利用黑色素具有将银氨溶液还原为金属银特性即嗜银反应原理来显示黑色素,染色后黑色素呈黑色,该法属于常用的黑色素特殊染色法,效果较其他染色理想。本产品仅用于科研领域,不用于临床诊断。
S0197 Nissl stain kit (methyl violet method) 尼氏染色试剂盒(甲基紫法) 室温避光保存,有效期12个月。神经元细胞体包括一个具有皱褶核膜的大细胞核、稀疏的染色质和一个明显的核仁。在细胞体中细胞质是尼氏颗粒,即能够代表粗面内质网并在很多神经元中产生特异的斑点状嗜碱性表现的嗜碱性颗粒。尼氏颗粒可以用很多染色来显示如中性红、亚甲基蓝、甲苯胺蓝和甲基紫等。染色的变异、pH和分化的时间使一些染色既可以仅突出尼氏物质,也可以显示神经元的细胞核和神经胶质。尼氏体(Nissl body)或称尼氏小体是分布于神经细胞胞质内的三角形或椭圆形小块状物质,能被碱性染料如硫堇、亚甲蓝、甲苯胺蓝和焦油紫等染料染成紫蓝色。各种神经细胞内都含有尼氏体,但其形状、数量、分布位置常常不同。尼氏体也存在于树突中,但不在于轴突和包体的轴丘。尼氏体会因为生理状态的变化而变化,尼氏体是神经元内合成蛋白质合成的重要部位,当神经元受到刺激后,包体内的尼氏体会明显减少。 尼氏染色试剂盒(甲基紫法),也称Nissl Stain kit (Methyl violet method),主要特点是操作简便、染色稳定、分化时间短,适用范围广,可以用于石蜡组织切片的尼氏物质、神经元等的染色,尼氏体的存在和消失是神经细胞是否受损的重要指标,当发生脑炎、脑缺血、轴突反应等情况时,尼氏体会发生溶解甚至消失。 本产品仅用于科研领域,不用于临床诊断。
产品编号S0205英文名称Oil red O stain kit (for cell culture)中文名称油红O染色试剂盒(细胞专用)别 名 油红O染色液(培养细胞专用); 油红O染色液(细胞专用); 脂肪染色;保存条件4℃保存,有效期12个月。产品介绍脂质 (Lipid) 是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。人体的脂肪主要有两种1、储存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。2、结构脂肪,如类脂 (磷脂、糖脂、胆固醇等),主要分布于细胞内。中性脂肪 (Neutral fat) 是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类,呈中性。中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。传统方法采用苏丹染料,最近发现偶氮染料油红O更适合脂肪的染色。油红O是很强的脂溶剂和染脂剂,较易与甘油三脂结合呈小脂滴状,与磷脂结合力稍差,其染色原理一般认为是物理上的溶液作用或吸附作用,借溶液作用使脂肪染色。 油红O染色试剂盒 (细胞专用) 主要用于显示人工培养细胞的脂肪变性和类脂质的异常沉着,细胞内出现多数中性脂肪滴,鉴别培养细胞中所发生的变化及其性质。标本不采用含有乙醇的固定液,脂肪的阳性染色结果呈橘黄至红色,但具体颜色因脂质浓度而定。 本产品仅用于科研领域,不用于临床诊断。
产品编号 S0255英文名称 Ruthenium red staining solution中文名称 钌红染色液保存条件 室温避光保存,有效期12个月。产品介绍美钌红(Ruthenium Red)分子式为Ru3O2Cl6.14(NH3),CAS号为11103-72-3,分子量为786.35,外观为红色晶体,可用做电压敏感的钙离子通道抑制剂。 钌红染色液在植物病虫害组织切品染色中,可将宿主植物组织中菌丝体和孢子染成红色。 本产品仅用于科研领域,不用于临床诊断。
产品编号 S0278英文名称 India ink中文名称 印度墨汁保存条件 室温避光保存,有效期12个月。产品介绍墨汁荚膜染色对于观察新型隐球菌有很好的作用,印度墨汁(India Ink)属于非常优质的墨汁,新型隐球菌菌体周围存在粘多糖荚膜物,用印度墨汁染色法能证明荚膜的存在。染色后新型隐球菌的荚膜取代了墨汁中的胶状碳粒,菌体被清楚无色透明的晕圈环所绕着。 本产品仅用于科研领域,不用于临床诊断。
产品编号S0286英文名称Crystal violet aqueous solution (1%)中文名称结晶紫染色液(1%)别 名Crystal Violet Staining Solution; 结晶紫水溶液(1%); 草酸铵结晶紫染色液(结晶紫染色液)(1%); 甲紫; 龙胆紫; 结晶紫;保存条件室温保存,有效期12个月。产品介绍结晶紫 (Crystal violet) 又称甲紫,分子式:C25H30N3Cl·9H2O,分子量:407.98,CAS:548-62-9。结晶紫属于碱性染料,能溶于水、乙醇,可以把组织和细胞核染成紫色。结晶紫染色液(Crystal Violet Staining Solution)在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广,是一种优良的染色剂。 本产品仅用于科研领域,不用于临床诊断。
产品编号D21062英文名称Levofloxacin中文名称左氧氟沙星别 名LVFX; (-)9-氟-2,3-二氢-3-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-7-氧-7H-吡啶骈[1,2,3-DE]-[1,4]苯骈噁嗪-6-羧酸; 可乐必妥; 洛氟沙星; 左旋氧氟沙星; 利复星;保存条件Store at RT.注意事项This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.产品介绍CAS:100986-85-4分子式:C18H20FN3O4分子量:361.37MDL:MFCD07772024级别:BR纯度:≥98%(HPLC)熔点:218℃沸点:571.5℃ at 760 mmHg外观:白色至淡黄色粉末溶解性:较易溶于氯仿或丙酮,微溶于乙醇,乙醚或甲醇,几不溶于水。微溶于水或甲醇。溶于冰醋酸或二氯甲烷。敏感性:光敏感用途:为全合成抗菌素,治疗各种细菌感染。
【保存条件】常温运输,2-8°C保存12个月【产品特点】l快速高效:5~10 min快速完成封闭;只结合封闭转印膜而不结合蛋白,因此不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点,与传统的脱脂奶粉和BSA封闭相比信噪比更高;l性能可靠:无蛋白配方,与抗体无交叉反应;l应用范围广:无磷酸化蛋白,无生物素,尤其适合磷酸化特异抗体及生物素检测系统;l增强抗体效果:使用本封闭液后,所需的最适抗体浓度低于常规使用浓度,可大大节省抗体使用量。【概述】本品专为快速高效封闭Western Blot转印膜而设计,采用无蛋白配方,避免抗体与封闭剂的非特异结合,可最大程度地降低背景。同时,本封闭剂无内源的磷酸化蛋白及生物素,对磷酸化特异抗体及生物素检测也不会产生干扰。本封闭剂不与蛋白产生非特异性结合,因而只封闭膜而不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点,大大提高了抗体检测灵敏度。实验表明本封闭剂对许多抗体都有不同程度的信号增强作用。然而这种信号增强作用因抗体而异,对某一特定抗体,并不一定具有确定的信号增强作用。【使用建议】1.完成转膜后,将转印膜放入到杂交孵育盒中,根据膜的大小适量体积的快速封闭液,需完全浸没覆盖膜,对于7.5×8cm的膜推荐使用量5-10ml;2.置于摇床轻轻摇动,室温封闭约10min;注意:使用本品通常封闭5~15min均可;经多种抗体的测试封闭10min的效果显著优于常规的BSA封闭1 h。对于一些背景非常高的抗体,可以尝试将封闭时间延长为30~60 min。如有特殊需要,也可4°C封闭过夜。3.封闭后的膜即可用于一抗孵育等后续实验。【注意事项】1.注意: 没有任何一种封闭剂能适合所有抗原和抗体检测系统。如出现本试剂不适合的抗体,请替换使用其它种类的封闭剂如BSA或脱脂奶粉等;2.本品仅用于科研用途,不得用于临床或诊断相关研究;3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品描述一步定向克隆试剂盒是一款简单、快速、高效的多片段DNA定向克隆产品,可以不依赖于连接酶,不受载体和目的片段的酶切位点限制,直接用同源重组的方法将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点,完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单,PCR产物一步定向克隆,目的片段与载体无缝连接,反应时间短至10分钟,阳性率达到95%以上,让您轻松完成实验。保存条件收到后请立即低速离心保存在-20℃;此Kit可在-20℃长期保存,避免反复冻融。
产品描述一步定向克隆试剂盒是一款简单、快速、高效的多片段DNA定向克隆产品,可以不依赖于连接酶,不受载体和目的片段的酶切位点限制,直接用同源重组的方法将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点,完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单,PCR产物一步定向克隆,目的片段与载体无缝连接,反应时间短至10分钟,阳性率达到95%以上,让您轻松完成实验。保存条件收到后请立即低速离心保存在-20℃;此Kit可在-20℃长期保存,避免反复冻融。
产品描述第一链cDNA合成预混液是以mRNA或者总RNA为模板,高效合成第一链cDNA。本产品含有反转录反应所需的全部试剂(NovoScript® II Reverse Transcriptase,RNase Inhibitor,Oligo(dT)18,Random N6,dNTPs)。反应时只需要加入RNA模板和水即可,操作简单,降低操作过程中的污染。制品中含有去基因组成分gDNA Purge,以RNA为模板进行cDNA第一链合成时,可以同步去除基因组DNA污染,反应结束后,75℃加热5分钟,就可以失活反转录酶,RNA酶抑制剂。合成的第一链cDNA能直接用于PCR或荧光定量PCR的模板,第二链cDNA的合成或线性RNA扩增,也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验。产品特点1)本制品采用耐高温逆转录酶,大幅提高热稳定性和cDNA合成效率;2)本制品中添加的NovoScript® II Reverse Transcriptase无RNase H活性,可避免第一链cDNA合成过程中,RNA/DNA杂交模板链中RNA降解,保证cDNA合成的质量;3)本制品中Random N6和Oligo(dT)18引物比例经过优化,可均匀合成样品中的cDNA;4)本制品中含有去基因组成分,逆转录时可同步去除基因组DNA污染。保存条件-20℃。注意事项1)用DEPC处理实验用到的所有实验器材,或者购买已经证明无核酸酶的实验用具,实验过程戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。2)确保所用试剂中无RNA酶污染。3)试剂盒要严格密封保存。在逆转录过程中,所有管子要确保扣严。4)纯化过的RNA必须保证不含有盐,金属离子,乙醇和苯酚,以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。5)为保证逆转录反应的有效进行,需使用高质量的RNA模板。6)当模板含量较低或后续PCR扩增片段过长时可以适当延长逆转录时间。7)2×NovoScript® Plus 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix、gDNA Purge及2×NovoScript® Plus No RT Control含有甘油,使用前请充分混匀后并短暂离心收集至管底再进行使用。仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。
产品描述第一链cDNA合成预混液是以mRNA或者总RNA为模板,高效合成第一链cDNA。本产品含有反转录反应所需的全部试剂(NovoScript® II Reverse Transcriptase,RNase Inhibitor,Oligo(dT)18,Random N6,dNTPs)。反应时只需要加入RNA模板和水即可,操作简单,降低操作过程中的污染。制品中含有去基因组成分gDNA Purge,以RNA为模板进行cDNA第一链合成时,可以同步去除基因组DNA污染,反应结束后,75℃加热5分钟,就可以失活反转录酶,RNA酶抑制剂。合成的第一链cDNA能直接用于PCR或荧光定量PCR的模板,第二链cDNA的合成或线性RNA扩增,也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验。产品特点1)本制品采用耐高温逆转录酶,大幅提高热稳定性和cDNA合成效率;2)本制品中添加的NovoScript® II Reverse Transcriptase无RNase H活性,可避免第一链cDNA合成过程中,RNA/DNA杂交模板链中RNA降解,保证cDNA合成的质量;3)本制品中Random N6和Oligo(dT)18引物比例经过优化,可均匀合成样品中的cDNA;4)本制品中含有去基因组成分,逆转录时可同步去除基因组DNA污染。保存条件-20℃。注意事项1)用DEPC处理实验用到的所有实验器材,或者购买已经证明无核酸酶的实验用具,实验过程戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。2)确保所用试剂中无RNA酶污染。3)试剂盒要严格密封保存。在逆转录过程中,所有管子要确保扣严。4)纯化过的RNA必须保证不含有盐,金属离子,乙醇和苯酚,以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。5)为保证逆转录反应的有效进行,需使用高质量的RNA模板。6)当模板含量较低或后续PCR扩增片段过长时可以适当延长逆转录时间。7)2×NovoScript® Plus 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix、gDNA Purge及2×NovoScript® Plus No RT Control含有甘油,使用前请充分混匀后并短暂离心收集至管底再进行使用。仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。
产品描述本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。预混液中已经将DNA聚合酶、精心优化的反应Buffer、dNTPs、SYBR Green I等试剂预混在一起,是一种2×浓度的预混型试剂,进行实验时,PCR反应液的配制十分简单方便。本制品使用新型抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,并结合精心优化的反应Buffer,具有更高的扩增灵敏度,反应特异性和扩增效率,能够在更宽广的范围内进行准确定量。产品特点高灵敏度:Novoprotein精心配制的RealTime PCR专用2×SuperMix,具有更高的扩增灵敏度和扩增效率。高特异性:采用新型工艺制备抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,无需热启动即可进行PCR反应,大大提高PCR扩增的特异性。快捷:PCR反应所必需试剂集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。保存条件-20℃避光储存。如需在一段时间内经常取用,可在2~8℃条件下储存3个月。避免反复多次冻融。质量控制纯度检测:所有组分经检测均无核酸内切酶残留、核酸外切酶残留、核酸残留。使用建议使用:请上下颠倒轻轻混合均匀,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,避免污染。建议反应体积为20~50μl。引物设计:一般为了增加灵敏度及扩增效率且抑制非特异性反应,扩增目标序列越短越好。建议设计成200bp以下。仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。
产品描述本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。预混液中已经将DNA聚合酶、精心优化的反应Buffer、dNTPs、SYBR Green I等试剂预混在一起,是一种2×浓度的预混型试剂,进行实验时,PCR反应液的配制十分简单方便。本制品使用新型抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,并结合精心优化的反应Buffer,具有更高的扩增灵敏度,反应特异性和扩增效率,能够在更宽广的范围内进行准确定量。产品特点高灵敏度:Novoprotein精心配制的RealTime PCR专用2×SuperMix,具有更高的扩增灵敏度和扩增效率。高特异性:采用新型工艺制备抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,无需热启动即可进行PCR反应,大大提高PCR扩增的特异性。快捷:PCR反应所必需试剂集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。保存条件-20℃避光储存。如需在一段时间内经常取用,可在2~8℃条件下储存3个月。避免反复多次冻融。质量控制纯度检测:所有组分经检测均无核酸内切酶残留、核酸外切酶残留、核酸残留。使用建议使用:请上下颠倒轻轻混合均匀,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,避免污染。建议反应体积为20~50μl。引物设计:一般为了增加灵敏度及扩增效率且抑制非特异性反应,扩增目标序列越短越好。建议设计成200bp以下。仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。
产品描述本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。预混液中已经将DNA聚合酶、精心优化的反应Buffer、dNTPs、SYBR Green I等试剂预混在一起,是一种2×浓度的预混型试剂,进行实验时,PCR反应液的配制十分简单方便。本制品使用新型抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,并结合精心优化的反应Buffer,从而有效抑制低温下的非特异性扩增,提高反应特异性和扩增效率,能够在更宽广的范围内进行准确定量。产品特点高特异性:采用新型工艺制备抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,无需热启动即可进行PCR反应,大大提高PCR扩增的特异性。高效:Novoprotein精心配制的RealTime PCR专用2×SuperMix,具有更高的扩增效率和扩增灵敏度。快捷:PCR反应所必需试剂集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。保存条件-20℃避光储存。如需在一段时间内经常取用,可在2~8℃条件下储存3个月。避免反复多次冻融。质量控制纯度检测:所有组分经检测均无核酸内切酶残留、核酸外切酶残留、核酸残留。使用建议使用:请上下颠倒轻轻混合均匀,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,避免污染。建议反应体积为20~50μl。引物设计:一般为了增加灵敏度及扩增效率且抑制非特异性反应,扩增目标序列越短越好。建议设计成200bp以下。仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。
产品描述本制品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行快速 Real Time PCR 的 2×浓度预混型试剂,PCR 反应液的配制十分简单方便。本制品使用突变型 Taq DNA 聚合酶,结合精心优化的反应 Buffer,可有效抑制低温下的非特异性扩增,实现快速 PCR 反应,并且能够在宽广的范围内对靶基因进行准确、快速、可重复的定量检测。产品特点快速:实现快速荧光定量,相较于传统 qPCR,反应时间减少 50%左右;保存条件-20℃避光储存,避免反复冻融。使用建议使用:请上下颠倒轻轻混合均匀,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,避免污染。建议反应体积为20~50μl。仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。Novoprotein是苏州近岸蛋白质科技股份有限公司的注册商标。请访问我们的注册商标页面。其他商标是其他所有者的财产。
产品描述本制品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行快速 Real Time PCR 的 2×浓度预混型试剂,PCR 反应液的配制十分简单方便。本制品使用突变型 Taq DNA 聚合酶,结合精心优化的反应 Buffer,可有效抑制低温下的非特异性扩增,实现快速 PCR 反应,并且能够在宽广的范围内对靶基因进行准确、快速、可重复的定量检测。产品特点快速:实现快速荧光定量,相较于传统 qPCR,反应时间减少 50%左右;保存条件-20℃避光储存,避免反复冻融。使用建议使用:请上下颠倒轻轻混合均匀,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,避免污染。建议反应体积为20~50μl。仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。Novoprotein是苏州近岸蛋白质科技股份有限公司的注册商标。请访问我们的注册商标页面。其他商标是其他所有者的财产。
产品描述Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag®)是一种新兴的DNA-蛋白质互作研究方法。CUT&Tag® 以融合了protein A/G 的Tn5 转座酶为核心,融合蛋白通过protein A/G 与抗体结合,使得Tn5 被栓系在靶位点周围,从而在目的位点附近进行酶切反应,并同时引入二代测序所必需的接头序列,产物DNA 经过后续提取与PCR 扩增后,得到直接用于测序的文库。CUT&Tag®与传统的ChIP-Seq 技术相比较,实验不需要超声打断,也不需要传统的连接法添加测序接头,操作简单、周期短、信噪比高、重复性好、细胞用量少,为极低起始细胞量和单细胞测序研究提供了可能性。自 2019 年 CUT&Tag 技术诞生以来,经过大量的实践,发现该技术在组蛋白修饰及部分转录因子与 DNA 互作研究中可以获得高信噪比的结果,但是针对一些与 DNA 结合力较弱或者结合具有高度动态性的 DNA 结合蛋白,较难得到理想的实验结果。针对此问题,近岸蛋白开发了可对细胞进行高浓度甲醛交联的CUT&Tag实验流程。为转录因子 -DNA 互作研究提供一种新的思路,这种需要甲醛交联的CUT&Tag实验被称为fcCUT&Tag(formaldehyde crosslinking CUT&Tag)。NovoNGS® CUT&Tag® 4.0 High-Sensitivity Kit (for Illumina)试剂盒包含常规非交联细胞CUT&Tag及甲醛交联细胞fcCUT&Tag实验中所需的各种缓冲液、ConA磁珠、DNA纯化磁珠、引物等全套建库试剂,可以用于组蛋白修饰和转录因子的染色质结合状态研究。与传统的CUT&Tag试剂盒相比,该试剂盒既可以对自然状态的细胞进行蛋白质-DNA互作研究,也可以对高浓度甲醛交联的细胞进行蛋白质-DNA互作研究,一盒两用。试剂盒包含CUT&Tag® 实验中孵育抗体、转座体、构建文库的相关试剂,可以用于组蛋白修饰和转录因子的染色质结合状态研究。本试剂盒包含高活性的ChiTag® pAG-Tn5, 相较于最初版本的pA-Tn5 转座酶,pAG结构域对兔、鼠等多种来源抗体具有广谱的强亲和性,在实验抗体的选择上具有更大的空间。针对CUT&Tag®打断产物DNA 提取过程中小片段丢失的问题,本试剂盒提供优化的Tagment DNA Extract Beads, 相较于常规的片段分选磁珠可以完整的回收CUT&Tag® 产物中的小片段DNA, 大大简化了酚氯仿-乙醇沉淀法的繁琐操作。此外,本试剂盒还提供了阳性抗体H3K4me3(兔抗)以及相应的二抗(羊抗兔IgG) ,用于阳性对照实验(仅B 包装提供阳性抗体)。图1: DNA-Target Protein-Antibody-ChiTag®结合示意图 图2: CUT&Tag 实验流程简图 产品用途DNA-蛋白质互作研究。在常见的哺乳动物细胞上用于替代传统的ChIP-Seq 技术,特别适用于细胞数量较少的样本,也可应用于经过处理的植物和酵母样本上。保存条件详见说明书仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。
产品描述Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag®)是一种新兴的DNA-蛋白质互作研究方法。CUT&Tag® 以融合了protein A/G 的Tn5 转座酶为核心,融合蛋白通过protein A/G 与抗体结合,使得Tn5 被栓系在靶位点周围,从而在目的位点附近进行酶切反应,并同时引入二代测序所必需的接头序列,产物DNA 经过后续提取与PCR 扩增后,得到直接用于测序的文库。CUT&Tag®与传统的ChIP-Seq 技术相比较,实验不需要超声打断,也不需要传统的连接法添加测序接头,操作简单、周期短、信噪比高、重复性好、细胞用量少,为极低起始细胞量和单细胞测序研究提供了可能性。自 2019 年 CUT&Tag 技术诞生以来,经过大量的实践,发现该技术在组蛋白修饰及部分转录因子与 DNA 互作研究中可以获得高信噪比的结果,但是针对一些与 DNA 结合力较弱或者结合具有高度动态性的 DNA 结合蛋白,较难得到理想的实验结果。针对此问题,近岸蛋白开发了可对细胞进行高浓度甲醛交联的CUT&Tag实验流程。为转录因子 -DNA 互作研究提供一种新的思路,这种需要甲醛交联的CUT&Tag实验被称为fcCUT&Tag(formaldehyde crosslinking CUT&Tag)。NovoNGS® CUT&Tag® 4.0 High-Sensitivity Kit (for Illumina)试剂盒包含常规非交联细胞CUT&Tag及甲醛交联细胞fcCUT&Tag实验中所需的各种缓冲液、ConA磁珠、DNA纯化磁珠、引物等全套建库试剂,可以用于组蛋白修饰和转录因子的染色质结合状态研究。与传统的CUT&Tag试剂盒相比,该试剂盒既可以对自然状态的细胞进行蛋白质-DNA互作研究,也可以对高浓度甲醛交联的细胞进行蛋白质-DNA互作研究,一盒两用。试剂盒包含CUT&Tag® 实验中孵育抗体、转座体、构建文库的相关试剂,可以用于组蛋白修饰和转录因子的染色质结合状态研究。本试剂盒包含高活性的ChiTag® pAG-Tn5, 相较于最初版本的pA-Tn5 转座酶,pAG结构域对兔、鼠等多种来源抗体具有广谱的强亲和性,在实验抗体的选择上具有更大的空间。针对CUT&Tag®打断产物DNA 提取过程中小片段丢失的问题,本试剂盒提供优化的Tagment DNA Extract Beads, 相较于常规的片段分选磁珠可以完整的回收CUT&Tag® 产物中的小片段DNA, 大大简化了酚氯仿-乙醇沉淀法的繁琐操作。此外,本试剂盒还提供了阳性抗体H3K4me3(兔抗)以及相应的二抗(羊抗兔IgG) ,用于阳性对照实验(仅B 包装提供阳性抗体)。图1: DNA-Target Protein-Antibody-ChiTag®结合示意图图2: CUT&Tag 实验流程简图产品用途DNA-蛋白质互作研究。在常见的哺乳动物细胞上用于替代传统的ChIP-Seq 技术,特别适用于细胞数量较少的样本,也可应用于经过处理的植物和酵母样本上。保存条件详见说明书仅供科研或生产使用,不可直接应用于人体。Novoprotein是苏州近岸蛋白质科技股份有限公司的注册商标。请访问我们的注册商标页面。其他商标是其他所有者的财产。
产品介绍 EasyFusion Assembly Master Mix 是一种快速、简单且高效的定向同源重组克隆试剂盒,可将目的片段一个或多个 (PCR 产物)定向克隆到任意载体的任意位置。该技术不依赖于 T4 连接酶、不受载体和目的片段的酶切位点限制, 仅需 15-30 分钟实现高效无缝连接。 操作步骤 1.线性化载体准备 可以通过以下两种方法获得线性化载体,最终载体的浓度需>10 ng/μl。(高浓度的载体有利于提高效率)。 (1)选择合适的酶切位点线性化载体。(单酶切或双酶切均可, 5´端突出、3´端突出或平末端均适用) (2)以载体为模板,设计引物,通过 PCR 的方式扩增出需要的线性化载体 2.扩增插入片段引物设计 通常通过 PCR 获得目的片段,引物设计要保证目的片段两端有至少 15bp-20bp 序列与线性化载体的两端一致的 同源序列。PCR 每条引物长度至少在 35-40bp 之间,包括 5´ 端和 3´端与线性载体同源的 15bp-20bp(不包括酶 切位点)以及目的片段特异性序列 20-25bp。 (1)单个片段的引物设计: 引物包含目的基因特异性序列和重叠序列 插入片段正向扩增引物设计方式为: 5´-上游载体末端 15-20bp 同源序列+目的基因特异性正向扩增引物序列(20-25bp)-3´ 插入片段反向扩增引物设计方式为: 5´-下游载体末端 15-20bp 同源序列+目的基因特异性正向扩增引物序列(20-25bp)-3´ 设计引物时,可以参考以下实例(以 pUC19 线性化载体为例): 3.PCR 扩增插入片段 推荐使用高保真聚合酶进行 PCR 扩增插入片段,以减少扩增突变的产生,选择聚合酶时无需考虑末端有无 A 加尾 发生(重组过程中将会被去除,在最终载体中不会出现)。PCR 扩增结束后,对目的 PCR 产物进行纯化:若是扩增模 板与克隆载体抗性不同,且 PCR 产物条带电泳单一,产物可以无需纯化直接用于重组反应,或者对 PCR 产物进行脱盐 等简单纯化;否则,需要进行琼脂糖凝胶电泳回收特异性的目的 PCR 片段。 4.重组反应进行 取出 EasyFusion Assembly Master mix, 置于冰浴中,配制下图应体系(如果不慎将液体粘在管壁,可通过短暂离心沉降) 注意:10 ul 反应体系中,载体和各插入片段建议量在 20-50ng 之间,载体与各插入片段的最佳摩尔比为 1:2-1:3 轻轻混匀反应体系,50℃反应 15-30 分钟(对于多片段重组或大片段重组,建议反应时间 30 分钟,可延长反应时 间至 1 小时);待反应结束后,将离心管置于冰上冷却数秒,之后将重组产物保存于-20℃或用于转化。 5. 反应产物转化、涂板及克隆鉴定 建议所使用的感受态细胞效率要达到> 5X 107 cfu/ug。转化步骤按照不同菌种的要求进行或者按标准转化操作 进行即可。菌落长出之后,建议采用菌落 PCR 进行阳性克隆鉴定,或者对样品进行测序确保正确。 保存条件及组成成分 -20℃保存及冰袋运输 组成成分:2X EasyFusion Assembly Master Mix , 125ul; Linearized pUC19 Vector (10ng/ul),5ul;Control Insert(0.5kb, 20ng/ul),5ul 注意事项 1. 线性化载体或目的片段的纯化的品质及浓度等较差会显著降低克隆阳性率及克隆数。 2. 重组质粒大小的增加(>12kb),克隆效率会显著降低,选择稳定性更好的感受态及转化效率更高效的感受态细胞。 3. 菌落较少时,建议适当增加重组反应产物的体积量,或者提高转化产物量等。 4. 随着重组片段数目的增加,克隆效率降低,建议增加引物重叠序列长度或适当延长反应时间。